中药活性成分（厚朴酚、盐酸小檗碱）诱导群体感应系统抗念珠菌毒力作用及机制研究

Oral candidiasis(OC) is the most common infectious diseases of oral mucosa caused by candida infection. OC can reduce patients’ quality of life, even increase the risk of oral cancer. In recent years, resistance and side effects of drugs increased the necessity of researching new antifungal preparations. Traditional Chinese medicine provides a new perspective to the research of new antifungal drugs. .Previous studies have found that Chinese medicine active ingredients berberine hydrochloride, honokiol can inhibit not only candida in floating condition but also in forms of biofilms. The conversion of candida from yeast to hyphal，formation of biofilm, and changes of the immunogenicity which is the virulence of candida, leads to the escaping of immune surveillance and the infection of the host. Quorum sensing(QS) system can inhibit the conversion of candida from yeast to hyphal and formation of biofilm. This study proposed to research on the effects of berberine hydrochloride, honokiol on virulence of candida using phase contrast microscope, scanning electron microscope, qRT-PCR method, XTT method, CLS observation and flow cytometry. Further, to research mechanism and signal transduction pathway of the effects by GC-MS method, q-PCR and Western blot.

口腔念珠菌病是由念珠菌属感染引起的最为常见的口腔黏膜感染性疾病。罹患口腔念珠菌病对患者生活质量有严重影响，甚至可增加口腔黏膜癌变风险。目前念珠菌耐药现象愈来愈突出，治疗的不良反应逐年增多。亟待研发新型的抗真菌药用于临床，中药为新药的研究提供了独特视角。.本课题组前期研究发现，中药活性成分盐酸小檗碱、厚朴酚对浮游态念珠菌以及多种念珠菌形成的生物膜均有抑制作用，但作用机制尚不清楚。群体感应分子法尼醇、酪醇可通过影响孢子-菌丝转变及生物膜形成而影响念珠菌的毒力或致病性。本研究拟通过相差显微镜、扫描电镜观察、qRT-PCR法、XTT法、CLS观察法，流式细胞术等探讨中药活性成分通过诱导群体感应系统干扰念珠菌孢子-菌丝转换、生物膜形成、改变念珠菌免疫原性等作用，通过GC-MS法、基因敲除、q-PCR法和Western blot法等方法研究其可能的作用机制及信号传导通路。

念珠菌感染是临床最常见的机会性感染，近年来发病率不断攀升，严重的深部真菌感染还可危及生命。由于广谱抗真菌剂的广泛使用和天然耐药菌株的出现，临床念珠菌耐药现象日趋严重。中药活性成分因具有显著的抗真菌作用效果、来源丰富、副作用小等优势，成为新型抗真菌剂筛选的重要来源及研究热点。本项目旨在探究中药活性成分厚朴酚、盐酸小檗碱的抗念珠菌作用及其机制，为未来新型抗真菌药物的研发提供理论依据。. 本研究通过梯度稀释法明确了厚朴酚、盐酸小檗碱对标准念珠菌的抑制作用，后证实二者对口腔分离的临床念珠菌菌株也有抑制作用。进一步机制研究发现：厚朴酚对念珠菌孢子-菌丝转换和生物膜形成有抑制作用。而小檗碱主要通过抑制生物膜形成、降低生物膜代谢、破坏生物膜结构发挥作用。此外，研究发现厚朴酚可显著抑制白念珠菌黏附、侵袭相关基因ALS1、ALS3，菌丝、生物膜形成相关基因EFG1、EAP1、TEC1，水解酶相关基因PLB2、SAP2，及β-1,3葡聚糖合成相关基因FKS1、FKS2及HOG1基因的表达，且呈剂量依赖性关系。研究结果提示厚朴酚可能通过Ras1-cAMP-Efg1及MAPK信号通路发挥抗白念珠菌作用。本项目研究成果为厚朴酚、盐酸小檗碱作为新型抗真菌药物或有效成分的研发提供了一定的理论基础，具有重要的理论意义及良好的临床应用前景。. 获本项目资助以来，共发表学术论文4篇，其中SCI论文3篇，非SCI论文1篇；培养博士研究生3名、硕士研究生2名、博士后1名。同时，通过本项目的资助，相关研究人员参与2次国际学术会议及10余次国内会议，多次汇报学术成果并获得奖项。