靶向ADAM15的长链非编码RNA（lncRNA1308）调控云南宣威肺癌(XWLC)生物学行为的分子机制研究

The long noncoding RNAs (lncRNAs) have been proven to play important roles in the development and progression of cancer. Recently, through exploring and analyzing the global gene expression profile from human lung cancer and adjacent tissues and lung cancer cell line XWLC-05 genome, a new long noncoding RNA fragment which has significant difference of expression in cancer tissues and adjacent ones was identified according to the notes and standard definition of UCSC, NONCODEV3, lncRNAdb and other lncRNA database. This 525-base lncRNA fragment has more than 200 complementary bases pairing to the promoter region of ADAM15 and its expression level was positively correlated with ADAM15.In this project, luciferase co-transfection, CHIP, RIP and other methods are to be adopted to investigate how this special lncRNA (lncRNA1308) regulates the target ADAM15 by cis -acting elements, transcription factor/chromatin modification complexes, binding proteins, or microRNAs , etc. To explore its different expression influence on lung cancer cell proliferation, invasion, and verify its effect on tumor growth in animal models. The project will provide new targets and new strategies for the intervention and early diagnosis and treatment of the progress, development, recurrence and metastasis of Xuanwei lung cancer in Yunnan province.

长链非编码RNAs被证实在癌症的发生、发展过程中发挥重要的功能。本研究组前期对云南宣威地区的人肺癌和癌旁组织以及从宣威肺癌细胞系XWLC-05的基因组表达数据的发掘和分析，通过UCSC、NONCODEV3、lncRNAdb等数据库对lncRNA的注释和定义标准，新发现了一个表达差异显著、长度约为525个碱基的lncRNA片段与ADAM15的启动子区存在200个以上的碱基互补配对关系且与ADAM15的表达呈正相关。本课题拟通过荧光素酶共转染等实验探讨该差异lncRNA（lncRNA1308）是如何通过cis作用元件、转录因子/染色质修饰复合物、结合蛋白、microRNAs等方式，实现对ADAM15的靶向调控，探究其表达变化对肺癌细胞增殖、侵袭的影响，并在动物模型上验证其对肿瘤生长的作用。本项目的开展将为云南宣威肺癌发生、发展和复发转移的干预及其早期诊断和治疗提供新靶点和新策略。

项目组对来源于云南宣威的肺癌组织进行了转录组mRNA和lncRNA芯片筛选，发现了两个重要的lncRNA：lncRNA-1308、lncRNA-PVT1-5，并对其在癌症发生发展中的功能和机制进行了较为系统的研究。.首先，我们选取XWLC、GLC以及A549、H292等肺癌细胞系和BEAS-2B肺上皮正常细胞作为研究载体，对lncRNA-1308及lncRNA-PVT1-5过表达的NSCLC肺癌细胞系进行细胞功能学分析，最后对lncRNA-1308与ADAM5竞争性结合miRNA-124及lncRNA-PVT1-5对SLC7A5的调控进行了功能和分子机制分析。相关结果发表在Biochem Biophys Res Commun （2018, 495 (3): p. 2350-2355）和Cancer Management and Research（2018:10 6599-6609) 。.对靶向GCNT3的miR-302b在非小细胞肺癌中的功能及机制方面，项目组通过检测GCNT3在4种NSCLC细胞系和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中的表达水平，结果发现敲低NSCLC细胞中GCNT3表达量能显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力，同时我们发现miR-302b可通过下调GCNT3的表达从而阻滞NSCLC细胞的细胞周期进程，并促进细胞凋亡。相关研究结果发表在Cell Physiology and Biochemistry（2018,50:987-1004)。.同时，我们通过FCM、MTT、transwell和wound-healing检测了miR-30a对A549细胞周期、增殖、侵袭和迁移的影响，发现miR-30a过表达对迁移和侵袭表现出了显著的抑制作用， eya2基因的过表达又在一定程度上恢复了miR-30a过表达引起的迁移和侵袭抑制。该成果发表在Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016,gmv139）。另外，本项目还对eya2的甲基化及其功能与肺腺癌关联性进行了研究，首先证实了eya2的全CG岛在肺腺癌细胞和组织中处于异常低甲基化，并且eya2基因的甲基化水平对肺腺癌细胞的增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移能力有重要影响。该部分工作发表在Oncology Reports（2015,34(5),2333-2342）。