内皮素-1促进人卵母细胞成熟及其机制研究

本研究探讨了内皮素-1对人卵母细胞成熟过程的旁分泌作用，更新过去认为卵母细胞的成熟主要受内分泌调节的观点，有助于加深对卵母细胞成熟的分子机理的认识。动物研究发现：内皮素-1能通过与卵丘细胞上的EDNRA结合，间接促进卵母细胞成熟，MAPK参与了这一过程。本项目以人卵母细胞和卵丘、颗粒细胞为实验材料，采用卵母细胞体外成熟、体外受精，细胞和胚胎培养，免疫荧光，定量PCR，Western blot等技术，验证在动物实验中所获结果，并探索内皮素-1通过激活卵丘细胞MAPK信号传导途径，继而影响其下游信号分子-卵丘细胞和卵母细胞之间的缝隙连接而诱发减数分裂的可能性。预期ET-1通过与卵丘细胞上的EDNRA结合，激活卵丘细胞MAPK信号传导途径，导致卵母细胞和卵丘细胞之间缝隙连接（Cx43和/或Cx37）被阻断，造成卵母细胞内cAMP水平下降而诱发减数分裂。

本研究探讨了内皮素-1（ET-1)对人卵母细胞成熟过程的旁分泌作用，更新过去认为卵母细胞的成熟主要受内分泌调节的观点，有助于加深对卵母细胞成熟的分子机理的认识。前期动物研究发现：内皮素-1能通过与卵丘细胞上的EDNRA结合，间接促进卵母细胞成熟。本项目发现ET-1在人卵丘细胞及壁层颗粒细胞上有表达，ETRA和ETRB在人卵母细胞上均有表达。而且，定量PCR检测发现人卵丘细胞的ET-1表达量与相应卵母细胞的成熟阶段有相关性，GV期卵子附着的卵丘细胞ET-1表达水平显著低于MⅠ期和MⅡ期，提示ET-1参与了卵母细胞成熟调节。在体外成熟培养过程中添加ET-1有助于人卵母细胞成熟，且该作用是通过卵丘细胞介导的。同时，我们对ET-1促进卵母细胞成熟的机理进行了探讨，通过ET-1处理前后卵丘细胞基因表达谱检测，发现ET-1通过下调GJB2，从而导致缝隙连接蛋白CX26关闭，促进卵母细胞成熟（GVBD的发生）。.本项目较好地完成了课题工作计划，已发表标注“国家自然科学基金面上项目”资助（81170567）的SCI研究论文4篇，申请国家发明专利一项，专利名：含Endothelin-1的人类卵母细胞体外成熟培养液和应用。已经获得初审合格。