基于NF-κB信号通路的益气活血法心肌保护作用机制研究--以黄芪总皂苷配伍红花总黄酮为例

Yiqi huoxue TCM therapy is one of the important methods of diet regimen. In recent years, legislation to Yiqi huoxue for various formulations is in most researches of myocardial ischemia. In these formulas, the emergence of drug is most frequently astragalus, ginseng and safflower. Therefore, astragalus and safflower compatibility arise precise and appropriate. However, the protective effects of ischemic myocardium and its mechanism is unclear. Our previous experiments showed that Astragalus compatibility safflower can inhibit inflammatory signaling pathway, suggesting that this compatibility may inhibit inflammation and play a protective role. This study was based on the preliminary study, using immunoblotting, fluorescence quantitative PCR, immunohistochemistry, endothelial cells to explore the NF-κB signaling pathway, and to understand the mechanism of myocardial ischemia protection of this compatibility, and to explore new strategy for prevention and treatment of myocardial ischemia in TCM rehabilitation

益气活血法是中医药物治疗和饮食养生重要方法之一。近年以益气活血为立法的各种配方对心肌缺血的作用多有研究。在这些方剂中，出现频率最高的益气药是黄芪和人参、活血化瘀药是红花，黄芪和红花配伍出现的次数最多，黄芪配伍红花是精当的益气活血方，但其对缺血心肌保护作用及其机制尚不清楚。我们前期的实验表明，黄芪配伍红花能够抑制炎症信号通路中的关键分子NF－κB的核转位，提示本配伍可能通过抑制炎症而发挥保护作用。本研究拟在前期研究基础上，运用免疫印迹、荧光定量PCR、免疫组化方法，从内皮细胞炎症反应中NF-κB信号通路切入，深入探索黄芪总皂苷配伍红花总黄酮发挥心肌缺血保护作用的机制，为探索中医养生康复防治心肌缺血的新策略提供实验依据。

项目背景：近年以益气活血为立法的各种配方对心肌缺血的作用多有研究。在这些方剂中，出现频率最高的益气药是黄芪和人参、活血化瘀药是红花，黄芪和红花配伍出现的次数最多，黄芪配伍红花是精当的益气活血方，但其对缺血心肌保护作用及其机制尚不清楚。我们前期的实验表明，黄芪配伍红花能够抑制炎症信号通路中的关键分子NF-κB的核转位，提示本配伍可能通过抑制炎症而发挥保护作用。本研究拟在前期研究基础上，从内皮细胞炎症反应中NF-κB信号通路切入，探索黄芪总皂苷（主成分黄芪甲苷）配伍红花总黄酮（主成分羟基红花黄色素A）发挥心肌缺血保护作用的机制，为探索中医养生康复防治心肌缺血的新策略提供实验依据。.研究内容:①体内证实As-Ⅳ+HSYA对小鼠急性心肌梗死的保护作用；②体外进一步证明As-Ⅳ+HSYA皮细胞介导下的炎症反应的独特作用。③体外研究本配伍对内皮细胞NF-κB转录因子生物学作用的影响。④证明NF-κB在本配伍心肌梗死保护作用中关键作用。.重要结果、关键数据及其科学意义：①体外研究：HSYA+As-Ⅳ可明显抑制TNF-ɑ对细胞活力的损伤；可降低Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9等细胞凋亡蛋白的表达；使Bcl-2 mRNA表达显著增加；可使Bcl-2荧光表达强度增高，Bax 荧光表达强度降低；可降低VCAM-1、ICAM-1、P-selectin、E-selectin蛋白的表达；可抑制IκB-α蛋白的磷酸化，抑制胞浆内P50蛋白降解。可见，本配伍对于血管内皮细胞中TNF-α诱导NF-κB信号通路的激活具有抑制作用，表明HSYA+As-Ⅳ可改善内皮细胞的炎症反应，而且其效果优于单独给药组。②体内研究：HSYA+As-Ⅳ能减小心肌缺血面积；下调心肌细胞中cleaved caspase-3、bax的表达，上调Bcl-2的表达；下调心肌细胞中E-selectin、P-selectin、VCAM-1、ICAM-1、MCP-1的表达；下调心梗死小鼠血清中TNF-a、IL-6的表达；抑制心梗鼠心肌细胞中磷酸化IκB的表达、上调细胞质中p65和p50表达、下调细胞核p65和p50。表明HSYA+As-Ⅳ可抑制炎症相关因子的表达、抑制因缺血而诱导的炎症反应；对细胞的凋亡起到抑制作用、且抑制NF-κB信号通路关键分子p50和p65的入核过程，抑制炎症的进程。