基于抑制破骨细胞生成的antago-miR-483-5p抗类风湿性关节炎骨破坏的作用及机理研究

Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory autoimmune disease characterized by chronic synovial inflammation, cartilage destruction and bone erosion. Excessive osteoclast formation plays an important role in the bone destruction in RA. Our previous study found that the expression of miR-483-5p in synovium of mice with collagen-induced arthritis (CIA) was positively correlated with bone destruction, and further cell experiments showed that miR-483-5p promoted osteoclast differentiation and bone destruction. Our findings suggest that the down-regulation of miR-483-5P level can inhibit bone destruction and subsequently treat RA. Therefore, we investigate the potential therapeutic effect of inhibiting miR-483-5p activity with intravenous administration of antagonist, antago-miR-483-5p in vivo. Furthermore, we elucidate the molecular mechanism by which miR-483-5p promotes osteoclast differentiation and bone destruction and provide a new target for the treatment of RA.

类风湿性关节炎（RA）是一种慢性炎症性自身免疫性疾病，以关节滑膜慢性炎症、软骨破坏和骨质侵蚀为主要病理特征。破骨细胞过度生成是引起RA骨破坏的重要因素。本团队前期研究发现在胶原诱导的小鼠关节炎模型（CIA）关节滑膜组织中miR-483-5p表达水平与骨破坏呈正相关，进一步细胞实验证明miR-483-5p可促进破骨细胞分化从而促进骨破坏。以上发现提示：下调体内miR-483-5P的水平可抑制骨破坏，从而达到治疗RA的目的。因此，我们拟体内注射miR-483-5P的拮抗剂antago-miR-483-5p，探讨其对RA骨破坏的治疗作用。在此基础上，深入阐明miR-483-5p促进破骨细胞分化及骨破坏的分子机制，为治疗RA提供新的靶点。

项目背景：抑制破骨细胞的分化已成为日益受到关注的治疗类风湿性关节炎（RA）骨破坏的有效策略。本研究表明 miR-483-5p促进破骨细胞分化。因此，miR-483-5p抑制剂antagomir-483-5p有望成为治疗RA的有效手段。.主要研究内容：（1）证明抑制 miR-483-5p 可抑制骨破坏：小鼠原代骨髓源性巨噬细胞（BMMs）或RAW264.7细胞向破骨细胞分化实验证明，上调miR-483-5p水平可促进破骨细胞分化和增加骨破坏；抑制miR-483-5p可抑制破骨细胞分化和减少骨破坏。（2）在RA动物模型中验证agomir-483-5p或antagomir-483-5P 对RA病理进程的调控作用：构建CIA小鼠RA动物模型，尾静脉注射agomir-483-5p或antagomir-483-5P，通过TRAP染色、H&E染色、Micro-CT扫描分析等实验检测实验动物骨小梁、骨密度等指标验证agomir-483-5p或antagomir-483-5P对RA病理进程的调控。（3）阐明 miR-483-5P 促进骨破坏的分子机制：通过Target Scan、miRDB软件预测miR-483-5p下游靶基因，通过荧光素酶（Luciferase）分析、免疫印迹方法、siRNA干扰、Rescue等实验，对miR-483-5p 直接调控下游靶基因进行进一步的论证，明确miR-483-5p调控破骨分化的分子机制。.重要结果：RA 患者滑膜组织和CIA模型小鼠的踝关节样本中miR-483-5P 表达水平升高。体内或体外实验结果表明，antagomir-483-5p抑制miR-483-5p水平可抑制破骨细胞生成，减少骨破坏。项目研究表明，DOK3和Timp2是 miR-483-5p调节破骨细胞分化和RA病理进程的直接靶点。.科学意义：本研究确立了antagomir-483-5p在RA治疗中的重要作用，可为治疗破骨细胞相关的骨破坏性疾病如RA和骨质疏松等提供新的思路。