microRNA146a抑制肝癌侵袭转移的多分子调控机制研究

microRNA分子是一类进化上保守的内源性非编码小RNA分子，在转录后水平调控靶基因的表达，广泛地参与了肿瘤的发生发展。我们前期基于microRNA芯片和生物信息学分析，发现miR-146a在肝癌组织中低表达，且与肝癌的临床转移相关；外源表达miR-146a可抑制肝癌细胞体内/外的侵袭转移能力，但其作用机制尚未完全阐明。本项目在前期研究基础上，拟采用荧光素酶报告基因、Western blot等方法确定miR-146a在抑制肝癌转移过程中调控的靶基因，及对下游信号通路分子的影响；从细胞水平和动物水平探讨miR-146a在抑制肝癌转移中对细胞生物学行为的作用，并通过检测肝癌组织中miR-146a及其靶基因的表达水平，明确miR-146a在转录后水平调控靶基因的具体形式。最终阐明miR-146a抑制肝癌侵袭转移的作用机制及可能的下游信号转导通路，为抑制肝癌转移提供新的候选基因靶位。

一、明确miR-146a在肝癌组织中普便下调，并与肿瘤转移相关。.二、明确miR-146a抑制肝癌细胞的侵袭运动.三、探讨了miR-146a抑制肝癌细胞侵袭转移的机制：miR-146a可促进肿瘤抑制基因APC表达，抑制VEGFA表达。激光共聚焦结果表明：miR-146a抑制β-catenin在核内聚集；而下调miR-146a的达可促进β-catenin在细胞核内的积累。体内研究表明：miR-146a可抑制小鼠外周血中VEGFA的表达。.四、HAb18G/CD147分子是miR-146a作用的靶分子：luciferase reporter assay及Western blotting分析结果表明miR-146a可接合到HAb18G/CD147 （以下简称CD147）3’-UTR并抑制CD147的表达。实时PCR结果提示miR-146a对CD147蛋白表达的影响与该分子mRNA水平无关。结果提示：miR-146a通过转录后翻译抑制CD147分子表达。外源表达不含3’-UTR的CD147，可抵消因miR-146a所引起的细胞侵袭能力下降，并可上调细胞内VEGFA的表达，但对APC的表达无明确影响；siRNA干涉SMMC-7721细胞内CD147表达，细胞的侵袭能力下降，同时也抑制了VEGFA的表达。综上结果表明CD147分子是miR-146a作用的一个新的靶分子。.五、肝癌组织中miR-146a和CD147分子相关性分析：miR-146a在肝癌组织中的表达水平与转移呈负相关，且与CD147、VEGF和NF-κB分子蛋白呈负相关。.六、肝癌组织中miR-146a启动子区甲基化抑制miR-146a的表达，CpG位点的甲基化水平可能与肝癌的侵袭转移潜能密切相关。