四逆汤抗心力衰竭的作用及其ghrelin机制探讨

我们早期的工作已经显示：四逆汤可通过扩张血管、改善心肌能量代谢、抗氧化应激以及抑制细胞凋亡等多个环节保护心肌细胞，改善心脏功能，从而起到防治心力衰竭的作用。我们上一个国家自然科学基金课题的工作观察到新型脑肠肽－ghrelin对心力衰竭有良好的防治作用。Ghrelin在四逆汤抗心衰效应中是否是一个中介物质尚不清楚，这是一个值得探讨的课题。 虽然ghrelin抗心衰的作用显著，但其价格极其昂贵（每毫克ghrelin，约人民币1.2万），不具备临床实用性。因此，在我们已有工作的基础上，深入观察四逆汤抗心衰的作用及其ghrelin机制，不但在四逆汤抗心衰研究方面可获得前沿性的理论信息， 为中药抗心衰的独特的整体调节作用找到新的实验依据，并为四逆汤用于心衰的临床防治提供新的线索和更深入全面的理论依据。

背景 本研究的目的在于探讨联用去甲乌药碱和[6]-姜酚对阿霉素性心肌损伤的保护作用及其可能的机制。. 方法 培养原代心肌细胞和H9c2心肌细胞。使用阿霉素处理心肌细胞12小时，建立心肌细胞损伤的实验模型。应用MTT法检测细胞存活率;双氯荧光素（DCFHDA）染色 荧光显微镜拍照检测细胞内活性氧（ROS）的水平，丙酮酸比色法、TBA比色法和DTNB(双硫代对硝基苯甲酸)法测定乳酸脱氢酶（LDH)、脂质过氧化产物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)。JC-1染色激光共聚焦显微镜拍照检测线粒体膜电位(MMP)。DAPI染色荧光显微镜拍照及Annexin V染色流式细胞仪检测细胞凋亡率；Western Blot法检测Cleaved Caspase-3、pro-Caspase-3、P-Akt、Akt,细胞色素C及Bax和Bcl-2的表达；荧光定量PCR法检测Bax、Bcl-2 mRNA的表达。. 结果 与对照组相比，阿霉素组细胞活力和MMP明显下降，LDH水平、MDA含量、p-Akt和Cleaved Caspase-3的表达水平及凋亡率明显增加，Bax/Bcl-2的比值在蛋白和mRNA水平均增高；与阿霉素组相比，去甲乌药碱和[6]-姜酚处理组细胞活力上升，与目前临床上认可的唯一用于预防阿霉素心脏毒性的药物右雷佐生作用相当，此外，去甲乌药碱和[6]-姜酚处理组还可以升高MMP、SOD水平及p-Akt的表达水平，降低LDH水平、MDA含量、Cleaved Caspase-3的表达水平、凋亡率及Bax/Bcl-2的比值。加入PI3K抑制剂后，药物的保护作用消失。. 结论 联用去甲乌药碱和[6]-姜酚可以减轻阿霉素性心肌损伤的程度，其保护效应产生机制可能与去甲乌药碱和[6]-姜酚的抗氧化应激效应及激活P13K/AKT信号转导通路有关。