抗单体C反应蛋白抗体在狼疮肾炎中参与补体调理与影响凋亡物质清除的机制研究

吞噬细胞对凋亡物质的清除障碍和补体系统功能异常是狼疮肾炎发病机制的研究热点之一。CRP可通过激活补体通路或与Fcγ受体结合调理吞噬细胞的吞噬作用来协助清除凋亡物质。我们前期工作发现多数狼疮肾炎患者中存在抗单体CRP(mCRP)抗体，抗体水平与疾病活动度密切相关，且该抗体可以抑制mCRP与补体经典途径启动因子C1q的结合。我们推测该抗体可能影响mCRP与重要的补体调节蛋白H因子结合造成补体过度活化，通过影响mCRP对吞噬细胞的调理作用而影响凋亡物质的清除。本课题拟从狼疮肾炎患者血浆中通过亲和层析分离抗mCRP抗体，利用ELISA及表面等离子共振方法研究该自身抗体如何影响mCRP与H因子的结合，通过C1激活试验及膜攻击复合物定量测定研究抗mCRP抗体对补体系统激活的影响，通过凋亡细胞吞噬试验研究抗mCRP抗体对吞噬细胞清除凋亡物质的影响。研究有助于阐明抗mCRP抗体在狼疮肾炎发病机制中的作用。

吞噬细胞对凋亡物质的清除障碍和补体系统功能异常是狼疮肾炎发病机制的研究热点之一。CRP可通过激活补体通路或与Fcγ受体结合调理吞噬细胞的吞噬作用来协助清除凋亡物质。我们前期工作发现多数狼疮肾炎患者中存在抗单体CRP抗体，抗体水平与疾病活动度密切相关，且该抗体可以抑制mCRP与补体经典途径启动因子C1q的结合。本课题组应用纯化的CRP制备亲和层析柱，分离和纯化了3例活动期狼疮性肾炎患者的抗单体CRP抗体。利用ELISA、SPR检测了抗单体CRP抗体对单体CRP与H因子结合能力的影响，结果提示抗单体CRP抗体可以抑制单体CRP与H因子的结合。建立了THP-1来源的巨噬细胞培养及诱导Jurkat细胞凋亡的模型；利用双标记流式细胞仪证明了抗单体CRP抗体对单体CRP对巨噬细胞的调理作用的影响。结果发现单体CRP可以显著增强巨噬细胞对晚期凋亡细胞的吞噬能力。抗单体CRP抗体可减弱巨噬细胞对晚期凋亡细胞的清除。狼疮肾炎的突出表现是血清中存在多种自身抗体，其发生发展并非仅与单一的致病性抗体有关。鉴于上述我们的研究中发现单体CRP、抗单体CRP抗体与C1q之间的作用，本课题组在提前完成了课题原计划后，及时调整了研究方向，进一步扩展研究了抗C1q抗体在狼疮肾炎发病机制中的作用。本课题组通过分析抗C1q与肾脏临床病理指标及肾脏预后的相关性，研究发现抗C1q抗体与狼疮性肾炎急性损伤程度密切相关，且优于其它常见自身抗体；抗C1q抗体与抗dsDNA抗体联合检测可预测肾脏预后。通过检测血清中C1q水平与肾活检组织中C1q沉积，发现抗C1q抗体与血清C1q水平及肾小球C1q沉积密切相关，提示肾脏是抗C1q抗体的靶器官之一。利用ELISA检测了抗C1q自身抗体对C1q介导的补体经典途径激活的影响，提示抗C1q自身抗体可抑制C1q介导的补体经典途径的活化。体外模拟了C1q调理的循环免疫复合物与红细胞粘附的过程，结果提示抗C1q自身抗体可抑制C1q调理的免疫复合物与红细胞的粘附。利用双标记流式细胞仪证明了抗C1q自身抗体对C1q对巨噬细胞的调理作用的影响，结果发现C1q可增强巨噬细胞对早期凋亡细胞的吞噬能力，抗C1q自身抗体可减弱C1q介导的巨噬细胞对早期凋亡细胞的清除。本眼在一定程度上阐明了抗单体CRP抗体对CRP生物学效应的影响及抗单体CRP抗体及抗C1q抗体在狼疮性肾炎发病机制中的意义。