microRNA在莱菔硫烷抑制膀胱癌上皮间质转化（EMT)中的作用研究

申请者前期工作表明，莱菔硫烷（SFN）能抑制膀胱癌细胞向基底膜粘附、运动和侵袭，这些作用与SFN诱导E-钙粘蛋白，即上皮间质转化（EMT）标志性抑制蛋白有关。EMT是肿瘤进展和侵袭转移的基本病理现象。最新研究提示，miRNA在肿瘤细胞EMT转化中起中心调控作用，一些miRNA可作为评价膀胱癌转移潜力的敏感指标。鉴于上述研究背景,推测SFN抑制膀胱癌EMT过程可能与miRNA有关。本研究采用miRNA基因芯片技术，利用miRNA基因库和生物信息分析方法，确定受SFN影响的miRNAs及其作用关系；结合转染技术和体外裸鼠移植瘤试验筛选出控制EMT过程的miRNAs；在此基础上，进一步研究这些miRNAs所调控的靶基因在SFN抑制EMT中的关键作用，以期获得SFN调控EMT信号通路中关键的miRNA、基因、转录因子。本研究将发现SFN抗肿瘤转移的新靶点和途径，为开发食源性抗癌剂提供理论基础。

本项目以体外培养的膀胱癌细胞T24为研究对象，探讨miRNA在莱菔硫烷抑制膀胱癌上皮-间质转化过程中的作用。本研究采用miRNA基因芯片技术，利用miRNA基因库和生物信息分析方法，确定受SFN影响的miRNAs及其作用关系；结合文献筛选出控制EMT过程的miRNAs，利用转染技术进一步研究这些miRNAs所调控的靶基因在SFN抑制EMT中的关键作用，以期获得SFN调控EMT信号通路中关键的miRNA、基因、转录因子。主要研究结果有：（1）miRNA芯片结果显示，莱菔硫烷作用组miRNAs表达与对照组相比显著上调的有12个，显著下降的有11个，结合芯片结果和文献对has-miR-200c进行系统的生物学分析，为深入研究莱菔硫烷对膀胱癌作用机制奠定基础。发现miR-200靶基因功能富集于血管生成、蛋白组装、调节MAPKKK级联反应、DNA依赖的转录过程、RNA生物合成等生物学过程（P<0.05），其靶基因信号通路富集于基础转录因子通路（P<0.05）；（2）发现莱菔硫烷能显著抑制T24细胞EMT标志物E-钙粘蛋白，促进vimentin以及转录抑制因子ZEB1的表达；（3）发现莱菔硫烷可促进T24细胞中miR-200c的表达，与芯片结果一致；（4）结合文献发现miR-200c作为miR200家族的一员在多种肿瘤细胞系中与ZEB1基因共同形成负反馈机制调节肿瘤侵袭转移过程，本实验发现莱菔硫烷可通过诱导miR-200c的表达，而降低其下游靶基因ZEB1的表达，从而促进E-钙粘蛋白以抑制EMT的进程。目前莱菔硫烷与膀胱癌转移之间的研究尚无报道，EMT作为肿瘤转移的关键机制，从该角度探讨莱菔硫烷抑制膀胱癌转移的机制具有实际意义。