从BMSC体内归巢、体外迁移研究补肾活血方治疗卵巢早衰的机制

How to improve the ovarian reserve of premature ovarian failure (POF) is a difficult problem of reproductive medicine. An internal association was found between bone marrow, peripheral blood and ovary: Germline stem cells may exist in bone marrow, migrate to ovary through peripheral blood, playing a role in postnatal oogenesis; Bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BMSC) transplantation can repair the ovarian reserve of POF mice. Based on previous results that Bushen Huoxue Recepi (BHR) regulate the expression of MVH - a maker of germline stem cells in bone marrow, peripheral blood and ovary, a hypothesis is suggested: BHR might improve the ovarian reserve of POF mouse by accelerating the homing and migration of BMSC. Mice POF model will be created by chemotherapy. BHR and BMSC trasplantation will be applied. The effect of BHR on ovarian reserve will be evaluated by the number of BMSC in ovary and the expression of homing related factors. The efficiency of BMSC homing is also assessed. Furthermore, we will establish a cell model of granulosa cell apoptosis and apply serum containing BHR intervention. Scratch and transwell assay will be operated to evaluate the effect of BHR on BMSC migration. The successful completion of our research will be helpful to study the mechanism of BHR on repairing POF.

如何改善卵巢早衰(POF)患者的卵巢储备功能一直以来是生殖医学领域的难题，研究发现，骨髓、外周血、卵巢中存在着内在联系：骨髓中可能存在生殖相关干细胞，经外周血运至卵巢局部，以发挥后天再生作用；骨髓间充质干细胞(BMSC)移植可修复受损的卵巢功能。基于前期研究结果：补肾活血方(BHR)可调控骨髓、外周血及卵巢中生殖干细胞标记物MVH的表达，本课题提出假说：BHR可通过“补肾”促进BMSC增殖，通过“活血”促进BMSC归巢、移行至卵巢局部，从而改善卵巢储备。拟以化疗药物构建小鼠POF模型，以BHR及BMSC为干预措施，从卵巢中BMSC归巢数量、卵巢局部归巢相关因子的表达等角度评估BHR改善卵巢储备的作用，及其对BMSC归巢效率的影响；并构建颗粒细胞凋亡模型，以BHR含药血清为干预措施，进行划痕实验及Transwell实验，评估BHR对BMSC迁移能力的影响，研究BHR改善POF的机制。

众所周知，目前女性平均生育年龄在不断推迟，而女性的卵巢储备和生育能力会随着年龄的增长而下降。此外，由于社会经济和生活环境的变化、癌症发病率升高等因素的影响，卵巢早衰（Primary ovary failure, POF）的发病率不断升高。如何改善高龄或POF患者的卵巢储备水平一直以来都是生殖领域的难题。补肾活血方（BHR）由归肾丸加减而来，临床上广泛用于月经病和POF的治疗，然而BHR治疗POF的潜在作用机制尚不明确。本研究使用C57/BL6小鼠单次腹腔注射环磷酰胺120mg/kg建立POF模型，BHR或脱氢表雄酮（DHEA）灌胃治疗，连续28天。在体实验部分，观察小鼠动情周期、卵巢形态、卵泡发育、血清激素水平、卵巢细胞凋亡和血管生成、骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC）在骨髓、外周血及卵巢的数量以及归巢相关因子的表达。体外实验部分，提取小鼠BMSC体外培养，使用BHR处理BMSC，观察BHR对BMSC增殖和迁移的影响。结果表明BHR治疗可以显著改善POF小鼠紊乱的动情周期，调节卵泡发育和血清激素水平，减少卵巢细胞凋亡，促进卵巢血管生成和骨髓内BMSC增殖，并通过上调卵巢内归巢相关因子HGF/cMET和SDF/CXCR4的表达，促进BMSC归巢至卵巢局部发挥治疗作用。细胞实验结果也表明BHR可以促进BMSC的增殖和迁移。我们的研究结果证实了BHR可以通过“补肾”促进BMSC增殖，通过“活血”促进BMSC归巢至卵巢局部，从而抑制卵巢细胞凋亡，促进卵巢血管生成，改善卵巢储备，这一发现，不仅为临床应用BHR治疗POF提供了科学依据，也为POF的论治提供了新的思路。