定量主要吸收成分、君臣佐使(药)对冠心II号抗动脉粥样硬化及其机理的贡献度

我们采取吸收成分与母方药效相比较的模式，揭示了冠心II号抗心梗主要由吸收的三个成分所引起，并发现：通过"成分(君臣佐使药)疗效÷母方疗效×100%"的简单公式，能定量成分/君臣佐使(药)对母方疗效的贡献度。拟用UPLC-MS分析方法：定量该方、君臣佐使药中主要成分含量；测定高脂饲养apoE-/-小鼠灌胃(ig)该方后动脉粥样硬化(AS)斑块的吸收成分；将主要吸收成分(单用或联合)、冠心II号、君臣佐使药分别ig模型小鼠，其中吸收成分剂量等于母方中含量，君臣佐使药剂量按照其在全方中的比例换算，以抗AS、抗氧化应激、抗炎等为指标，观察用药前后的变化；从药效程度上，比较成分、君臣佐使药与母方的疗效，以抗AS总成分与母方两组的疗效类似性，阐明该方抗AS药效成分及其作用机理，定量主要吸收成分、君臣佐使(药)对全方疗效的贡献度，揭示君臣佐使的药效成分；开辟方剂组成原则、配伍作用机理研究的新途径。

基于我们以前工作基础，本次研究采用简单公式（成分疗效÷母方疗效×100%），定性定量出方剂主要吸收生物活性成分对母方疗效的贡献度，进一步将主要成分与中药方剂中君臣佐使药联系起来，把成分的疗效转换成君臣佐使药的疗效，可以有效定量君臣佐使药对全方疗效的贡献度，开创一条比较精确阐明方剂中君臣佐使药疗效作用机理的新方法。. 在本项目研究中，我们运用UPLC-MSMS检测方法建立了冠心II号汤剂质量控制标准，明确冠心II号中君药（丹参川芎）主要化学成分是丹参素T、阿魏酸F，臣药（红花芍药）是羟基红花黄色素 A ，芍药苷等。定性出APOE-/-小鼠AS模型灌胃冠II号后UPLC-MSMS测定血浆主要吸收成分阿魏酸、羟基红花黄色素A和丹参素，其含量分别为：20.4ng/ml、154.0ng/ml和6.9ng/ml。冠心II号，FTA合用及单独F/T/A成分对AS小鼠模型给药后观察相关指标(小鼠胸主动脉HE染色及油红O染色；TG/TC/HDL-C/LDL-C，GSH、MDA、SOD、CAT，TNF-a/VACM-1/IL-1β mRNA基因及TNF-a/VACM-1/IL-1β蛋白变化)，均有抑制粥样斑块形成，降低血脂、抗炎及抗氧化应激等作用，根据公式（成分疗效÷母方疗效×100%）计算得出F、T、A分别代表了母方56%、63%、36%疗效。在完成标书原有计划基础上，我课题组进一步在细胞分子水平上证实F可以通过抑制平滑肌细胞增殖抗AS，T可以通过抑制泡沫细胞形成抗AS；并探索研究GX II/丹川红及其FTA对离体血管舒张机理，增加了丹川红与当归补血汤舒血管机制的研究；增加了冠心II/丹川红抗AS与抑郁共病的研究。大大拓宽与加深了GXII抗AS作用机理的认识。. 中医药学术界长期面对的一个重要问题是如何阐明方剂的有效成分，这也是导致国际上评价中医药存在“质量、疗效、安全”三大难点的关键问题，因为方剂的药效物质不清楚，就难以制定科学的质控标准，难以获得可重复的疗效，存在用药安全隐患。我们在本项目中提出并验证了“定量主要吸收成分、君臣佐使药对母方疗效的贡献度”这一构思为解决上述问题做了有益的探索，为建立中药方剂的质控标准、离体方剂药理作用机制、中药方剂的药理学研究奠定基础，推动了中医药学科的发展。