miR-214调控宫颈癌细胞增殖与运动的机制研究

微小RNA（miRNA）是一类高度保守的长约22nt的内源性单链小RNA分子，与靶mRNA结合可降解mRNA或抑制翻译，进而在转录后水平调控生物体生长发育、细胞分化等诸多过程。在人类700多种miRNA中，已经明确功能的靶基因分子极少。本课题组前期工作中发现miR-214在人类宫颈癌组织和细胞中低表达，并且miR-214可以抑制宫颈癌细胞的增殖与运动。由于miRNA是通过调控靶基因的表达而发挥生物学功能的，我们应用cDNA芯片技术和生物信息学结合的方法筛选到十几个miR-214的候选靶基因，包括已证明与细胞增殖和运动相关的基因Plexin-B1。本项目在此基础上进一步确证其候选靶基因，并进行功能分析，以深入研究miR-214抑制宫颈癌细胞增殖和运动的分子机制，为进一步了解miRNA分子在肿瘤发生发展中的作用奠定理论基础。

miRNA是一类约22nt大小的非编码RNA分子，通过与其靶基因的相互作用而对基因表达发挥负性调节的作用。研究已经发现miRNA分子可以发挥癌基因或抑癌基因的作用，参与癌症的发生发展过程。本课题着重研究miR-214在宫颈癌HeLa细胞中的具体功能，鉴定其下游直接的靶基因，并通过分析靶基因的功能，以期阐明miR-214发挥作用的具体分子机制，从而为有助于理解宫颈癌发生发展的分子机制，促进开发新的有效的诊断和治疗策略。. 首先，我们利用实时荧光定量PCR技术检测miR-214在21对宫颈癌及其邻近正常组织中的表达水平，发现miR-214在宫颈癌组织及宫颈癌HeLa细胞中表达明显下调；接着，在宫颈癌HeLa细胞中过表达miR-214，利用MTT实验、生长曲线、克隆形成、细胞划痕、Transwell迁移和侵袭实验、细胞生存实验、药敏实验及TUNEL实验检测miR-214对HeLa细胞恶性表型的影响；结果证明，过表达miR-214明显降低HeLa细胞的活性、生长和增殖，迁移和侵袭能力以及细胞的生存能力，增加细胞对化疗药物顺铂的敏感性，而且可以促进细胞的凋亡。然后，通过生物信息学方法结合miRNA表达谱分析，筛选miR-214作用的可能靶基因，并利用荧光报告载体实验结合实时定量PCR和Western印迹技术验证miR-214对其靶基因的直接调控作用及其可能的调控方式；结果我们筛选并证实了miR-214发挥作用的两个直接靶基因——Plexin-B1和Bcl2l2。最后，利用RNA干扰技术，结合上述表型实验分析干扰靶基因表达后细胞表型的变化，发现RNA干扰Plexin-B1表达后细胞生长与增殖、迁移与侵袭能力均减弱；而RNA干扰Bcl2l2后则使得HeLa细胞的生存能力降低，对顺铂的敏感性增加。. 总之，我们研究发现了miR-214在宫颈癌组织中呈低水平表达，它通过调节其直接靶基因——Plexin-B1和Bcl2l2的表达而发挥抑癌基因的作用，其中，Plexin-B1主要负责细胞生长与增殖、迁移与侵袭能力的改变，而Bcl2l2参与miR-214引起的细胞生存能力及对顺铂敏感性的变化。这些结果比较系统地阐明了miR-214在宫颈癌中的功能及其作用的分子机制，必将为开发宫颈癌新的诊断和治疗手段提供新的选择。