两种药用植物中基于T细胞免疫抑制活性生物碱成分及作用机制

Rigorous studies showed that 3-5% of the population have suffered from the autoimmune diseases. Present immunosuppressive agents have obvious side effects, such as hepatotoxicity and nephrotoxicity. It is urgent to research and develop new safe and effective immunosuppressants. Since T cells play a pivotal role in the process of autoimmune diseases, it is an important strategy to explore effective lead compounds inhibiting T cell proliferation with low toxicity from medicinal plants. In our preliminary study, the alkaloids from Rauvolfia yunnanensis and Narcissus tazetta var. chinensis have been found to exhibit remarkable suppression on T cell proliferation, especially some of them are new compounds. This project aims to further track the alkaloid constituents inhibiting T cell proliferation from these two medicinal plants, obtain target compounds with high effect and low toxicity by verifying activity and testing toxicity, determine the stages and targets of action, and investigate their potential mechanism of action. The successful implementation of this research is very important for the discovery of new drug candidates and targets for autoimmune diseases.

研究表明：3-5%的人类健康受到自身免疫性疾病的威胁，而现有免疫抑制剂的肝肾毒性等副作用明显，所以开发新型高效特异免疫抑制剂迫在眉睫。由于T细胞异常活化增殖在自身免疫性疾病发病机制中起关键作用，因此，从药用植物中筛选高效低毒、抑制T细胞增殖的先导化合物，是研发治疗自身免疫性疾病药物的重要策略之一。我们前期发现云南萝芙木和中国水仙中的生物碱成分显著抑制T细胞增殖,且部分为新化合物。本项目拟在此基础上，以T细胞增殖为检测指标，进一步从两种药用植物中跟踪分离抑制T细胞增殖的活性生物碱成分，通过活性验证和毒性检测获得高效低毒目标化合物，观察目标化合物对T细胞膜表面分子及细胞因子的影响，确定其作用的靶点和环节，探讨作用机制。本研究的成功实施对于发现新的治疗自身免疫性疾病的候选药物和靶点具有重要意义。

研究表明：3-5%的人类健康受到自身免疫性疾病的威胁，而现有免疫抑制剂的肝肾毒性等副作用明显，所以开发新型高效特异免疫抑制剂迫在眉睫。由于T细胞异常活化增殖在自身免疫性疾病发病机制中起关键作用，因此，从药用植物中筛选高效低毒、抑制T细胞增殖的先导化合物，是研发治疗自身免疫性疾病药物的重要策略之一。本项目从中国水仙和云南萝芙木两种药用植物中分离鉴定了36个生物碱成分，其中新化合物6个，16个化合物为首次从两种植物中分离得到，丰富了两种药用植物的化学成分及结构类型。对分离得到的36个生物碱单体进行anti-CD3/anti-CD28单克隆抗体诱导的人T细胞增殖抑制活性筛选。结果筛选到13个化合物具有免疫抑制活性，其中(+)-narciclasine活性最强IC50 = 14 ± 5 nM，因此选择(+)-narciclasine作为目标单体化合物进行作用机制研究。(+)-Narciclasine抑制T细胞增殖，且没有明显毒性；通过抑制T细胞表达CD25及分泌IL-2，抑制T细胞的活化；阻滞细胞周期于G0/G1期；显著抑制活化T细胞分泌IFN-γ，IL-6和IL-17。进一步研究表明(+)-narciclasine抑制IκB 磷酸化，阻滞NF-κB 信号转导，减轻ConA诱导的小鼠自身免疫性肝炎肝损伤和降低血清中天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 和丙氨酸氨基转移酶 (ALT)的水平。既往的研究表明(+)-narciclasine具有抗肿瘤、抗炎、抗艾尔兹海默症等活性，但未见其免疫抑制方面的研究报道。本研究结果表明(+)-narciclasine有望作为治疗自身免疫性疾病的潜在药物，由于中国水仙在我国已经大面积种植，资源丰富，因此可以作为(+)-narciclasine的可持续来源开发利用。