胃癌特异性血清microRNA的筛选与鉴定

胃癌是我国恶性高发肿瘤之一，死亡率居各种恶性肿瘤之首。筛选出特异性好、灵敏度高的胃癌标志物是目前胃癌研究工作的重点之一。本项目拟采用microRNA芯片技术比较分析胃癌患者血清及正常血清microRNA表达谱，从中筛选出胃癌特异性microRNA；通过荧光定量PCR技术检测胃癌特异性microRNA在胃癌患者、其它消化道疾病患者及健康人血清中的含量，确定其cutoff值、特异性及灵敏度，探讨其作为胃癌临床诊断生物学指标的可行性；进一步采用原位杂交技术检测胃癌特异性microRNA在胃癌组织中的表达量，分析组织及血清中胃癌特异性microRNA表达与胃癌临床病理特征的相关性，探讨其在胃癌预后评估及转移复发监测中的意义。通过本项目研究，将筛选出新的胃癌标志物，并为肿瘤标志物的筛选提供新的思路与方法，具有深远的科学意义和重要的现实意义。

胃癌是我国恶性高发肿瘤之一，死亡率居各种恶性肿瘤之首。筛选出特异性好、灵敏度高的胃癌标志物是目前胃癌研究工作的重点之一。在本研究中，我们采用microRNA芯片技术比较分析胃癌患者血清及正常血清microRNA表达谱，初步筛选出了36个在胃癌患者血清中表达上调及59个表达下调的microRNA；然后通过RT-qPCR技术在160例胃癌、30例结直肠癌、30例胰腺癌、30例胃炎患者的血清及100例健康对照者的血清中，对这95个microRNA的表达水平进行检测，最终筛选出2个在胃癌患者血清中表达降低的microRNA（miR-27a和miR-744）及1个表达上调的microRNA（miR-767-5p），ROC曲线分析发现其曲线下面积分别为0.762、0.702、0.738，cut-off值分别为3.50、1.10、0.44，敏感性分别为87%、76%、54%，而特异性分别为64%、62%、86%。此外，我们还采用原位杂交技术检测了220例胃癌组织及90癌旁非肿瘤组织中miR-27a、miR-744及miR-767-5p的表达水平，证实miR-27a、miR-744在癌旁非肿瘤组织中高表达，而在肿瘤组织中表达降低甚至缺失，而miR-767-5p则在癌旁非肿瘤组织中低表达，在肿瘤组织中表达显著上调。相关性分析表明胃癌组织中miR-27a的表达强度与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关；而miR-744的表达强度与肿瘤大小、分化程度、浸润深度及TNM分期有关；miR-767-5p的表达强度与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关；生存分析显示miR-27a低表达或miR-767-5p高表达的胃癌患者5年生存率明显低于miR-27a高表达或miR-767-5p低表达的患者，而miR-744低表达或高表达的患者的5年生存率无显著差异。.通过本课题研究，我们筛选出3个microRNA（miR-27a, miR-744 和miR-767-5p），其血清浓度及在肿瘤组织中的表达强度对胃癌的诊断及预后评估具有重要的临床价值。项目资助课题组发表SCI收录论文4篇。