Ⅱ型胶原降解片段在兔软骨终板退变中调控机制的研究

Disc nutrition and metabolic disorders caused by cartilage endplate degenerative is the initiating factors of the disc degeneration. The issue is focus on the effect of typeⅡcollagen fragment on the regulation mechanism of rabbit cartilage endplate degradation; the application of RNA interference and specific inhibitors of integrin β1 and protein kinase C is used to analysis the role of integrin β1 and protein kinase C in the process of cartilage endplate degradation which induced by typeⅡcollagen fragment; We establish a rabbit disc degeneration model by the disc injection of typeⅡcollagen fragment, which compared with the traditional operation animal model group、asepsis PBS injection group、fibronectin fragment injection group and the control group, both of the observation of organization morphology、special dyeing and the measurement of the cartilage endplate calcification degree、alkaline phosphatase activity are compared to evaluate the validity of different animal models.

软骨终板退变引起的椎间盘营养和代谢障碍是椎间盘退变的始动因素。本课题对Ⅱ型胶原降解片段在兔软骨终板钙化退变过程中的作用进行研究；分别应用RNA干扰和特异抑制剂对整合素β1和蛋白激酶C在Ⅱ型胶原降解片段致软骨终板退变过程中的作用进行分析研究；通过椎间盘内注射Ⅱ型胶原降解片段建立椎间盘退变模型，与传统的椎间失稳手术模型组、椎间盘内注射纤维粘连蛋白降解片段组、椎间盘内无菌PBS液注射组以及对照组等分别进行组织形态学、特殊染色、软骨终板钙化程度、碱性磷酸酶活性等指标的测定和比较，评价此种新模型的有效性。

Ⅱ型胶原降解片段是软骨终板代谢过程中重要的代谢产物，软骨终板退变引起的椎间盘营养和代谢障碍是椎间盘退变的始动因素。本课题对Ⅱ型胶原降解片段在兔软骨终板钙化退变过程中的作用进行研究，首先，利用荧光实时定量PCR技术和免疫沉淀技术检测Ⅱ型胶原蛋白、整合素β1亚基、MMP13、X型胶原的表达变化，结果发现：加入Ⅱ型胶原降解片段后，Ⅱ型胶原蛋白、整合素β1亚基、MMP13、X型胶原表达较对照组均明显增加，Ⅱ型胶原降解片段可有效促进Ⅱ型胶原、MMP13、整合素β1、X型胶原的基因及蛋白表达，从而促进软骨终板细胞退变。然后我们分别应用RNA干扰和特异抑制剂对整合素β1和蛋白激酶C在Ⅱ型胶原降解片段致软骨终板退变过程中的作用进行分析研究：发现整合素β1和蛋白激酶C受到抑制干扰后Ⅱ型胶原降解片段诱导的软骨终板退变过程将被明显抑制,说明整合素β1和蛋白激酶C参与调控Ⅱ型胶原降解片段诱导的软骨终板退变机制。通过椎间盘内注射Ⅱ型胶原降解片段建立椎间盘退变模型，与传统的椎间失稳手术模型组、椎间盘内注射纤维粘连蛋白降解片段组、椎间盘内无菌PBS液注射组以及对照组等分别进行组织形态学、特殊染色、软骨终板钙化程度、碱性磷酸酶活性等指标的测定和比较，评价此种新模型的有效性，研究证明椎间盘内注射Ⅱ型胶原降解片段组可有效促进椎间盘软骨终板退变，是方便的、可靠、有效的椎间盘退变模型。