mRNA推断皮肤损伤时间的多因子与多因素实验研究

皮肤损伤时间推断的研究虽较多，但迄今仍难以在实践中获得普遍应用和认可。其主要原因是缺乏对影响各推断指标表达的因素进行研究，如年龄，损伤程度和类型等。我们研究发现：同一个体动物，切创和挫伤后研究指标的表达过程并不一致，揭示了损伤类型的不同导致推断指标表达的差异。鉴于此，本项目拟对年龄、损伤程度、损伤类型等因素进行量化，开展多因子、多因素推断损伤时间研究。采用差异显示PCR检测分析不同条件下大鼠皮肤修复过程中mRNA的表达过程，并对分析结果进行皮肤特异性、死后早期损伤、死后病理环境、外界温湿度等因素深入研究，筛选不受上述因素影响的差异表达基因作为推断指标，用Real-time PCR定量分析筛选指标的表达情况，并应用显色原位杂交、免疫组化、常规病理对研究过程进行多角度、多技术的质控，从而分别建立上述不同条件下，推断损伤时间稳定可靠的方法，并评价各种因素的影响作用，为法医学实践应用提供科学依据。

在法医学病理学领域，早期损伤时间推断是重要的研究焦点之一，虽然既往研究报道较多，但迄今仍难以在实践中获得普遍应用和认可。其主要原因是缺乏对影响各推断指标表达的因素进行研究，如年龄，损伤程度和类型等。通过本项目研究，我们建立了一个量化的皮肤挫伤大鼠模型，参照皮肤损伤修复研究领域内切创的动物模型建立方法，并对切创和挫伤中的基因表达稳定性进行研究，在6个候选mRNAs中，ACTB和PRL19是表达最为稳定的基因，而RPL10a和RPL13a的表达稳定性最差，在8个候选的snoRNAs、miRNAs中，SNORD95、SNORD96A、SNORD68 是三种表达最为稳定的基因，而SNORD72和U6 则相对不稳定。为了进一步大范围筛选可用于早期损伤时间推断的表达基因，本项目采用美国昂飞公司基因表达谱芯片，对挫伤后1h,3h,24h,2d,7d肌肉组织开展基因表达研究，筛选出了8741个具有表达差异的基因，根据与对照相比，在同一表达趋势时仅有一个表达峰的基因表达趋势筛选标准，选用符合要求的36个表达趋势图筛选出1128个表达基因，并进一步通过信号通路分析，上述基因涉及195个表达通路，通过网络分析，发现这些基因主要涉及修复过程中的调亡、炎症因子表达、细胞循环、癌基因表达、糖代谢等主要功能。随后的研究工作将对上述筛选基因对早期损伤时间推断中的应用价值进一步评价。