一种基于病毒源性小RNA高通量测序的虫媒病毒快速甄检方法的建立

在未知病毒发现方面，目前最具优势的方法是基于Solexa的高通量测序技术，但大量的宿主转录组信息给后续生物信息学分析带来极大的困难。最新的研究表明，特别是在蚊、蜱等媒介节肢动物体内，虫媒病毒的感染能诱导宿主细胞产生大量的病毒源性小干扰RNA（virus derived small interfering RNAs，vsRNAs），是宿主抵御病毒感染的重要机制。vsRNAs本质上是经宿主细胞酶切加工的病毒基因组微小片段，通过拼接即可将其还原为全长的病毒基因组序列。因此，通过对蚊、蜱等节肢动物中的vsRNA进行高通量测序，理论上可快速鉴定已知和未知的病毒。本项目拟以虫媒黄病毒为研究对象，建立基于vsRNAs的高通量测序技术，直接对样本小RNA进行高通量测序，可排除宿主转录组信息干扰，为虫媒病毒以及其它RNA病毒的快速甄检提供全新的方法。

在未知病毒发现方面，目前最具优势的方法是基于Solexa的高通量测序技术，但大量的宿主转录组信息给后续生物信息学分析带来极大的困难。最新的研究表明，特别是在蚊、蜱等媒介节肢动物体内，虫媒病毒的感染能诱导宿主细胞产生大量的病毒源性小干扰RNA（virus derived small interfering RNAs，vsRNAs），是宿主抵御病毒感染的重要机制。vsRNAs本质上是经宿主细胞酶切加工的病毒基因组微小片段，通过拼接即可将其还原为全长的病毒基因组序列。因此，通过对蚊、蜱等节肢动物中的vsRNA进行高通量测序，理论上可快速鉴定已知和未知的病毒。本项目拟以虫媒黄病毒为研究对象，建立基于vsRNAs的高通量测序技术，直接对样本小RNA进行高通量测序，可排除宿主转录组信息干扰，为虫媒病毒以及其它RNA病毒的快速甄检提供全新的方法。.通过课题实施，获得以下主要结果：.1、新疆地区蜱媒小RNA数据库的构建及蜱媒病毒的发现.在新疆省伊利与博州境内林地景观中，采集全沟硬蜱等蜱种，构建新疆地区蜱媒小RNA数据库，初步结果表明细菌、真菌类微生物较多，致病性病毒较少。.通过对蜱媒小RNA数据库进行分析，发现蜱传脑炎病毒的小RNA序列。经常规病毒分离培养及基因组全序列测定，最终获得全长为11031nt的病毒基因组全序列，将其命名为TBEV XJ-01（JX534167）。首次从国内发现西伯利亚型蜱传脑炎病毒，表明我国新疆北部同时存在西伯利亚亚型与远东亚型TBEV的流行。.2、新疆地区蚊媒病毒测序分析及蚊媒病毒的发现.通过对新疆地区蚊媒进行测序分析，病毒分离培养，常规RT-PCR检测及动物致病性研究，从新疆地区蚊媒中发现一株新的病毒，新分离病毒属于布尼亚病毒科正布尼亚病毒属布亚韦拉（Bunyamwera）血清复合群，命名为艾比湖布尼亚病毒（Abbey lake bunyavirus，Ab-BUNV）。通过细胞/动物模型对病毒致病性进行评价。Ab-BUNV接种哺乳动物细胞系后能快速引发细胞病变现象， Ab-BUNV对小鼠具有高致病性。2014年八、九月，收集艾比湖周边出现的急性发热病人血清，通过间接免疫荧光方法检测发现发热病人体内存在艾比湖病毒IgM、IgG抗体，初步证明艾比湖病毒与人类疾病的关系。