新型视神经保护药物局部给药系统的实验研究

视网膜神经节细胞凋亡导致视神经损害，是当今青光眼治疗还未攻克的核心难点。目前临床治疗的给药方式存在药效不显著及全身毒副作用大的缺点。超声微泡是一种靶向释放药物的新技术。研究已证实蒺藜皂苷与神经生长因子能明显减少视网膜神经节细胞凋亡，增强其存活，起到治疗视神经损害的作用。本课题拟首次开发一种新型超声微泡介导的眼科局部给药系统，两种药物单独和配置成复合制剂，通过体外实验研究超声强度、微泡浓度及超声微泡介导药物对视网膜神经节细胞的抗凋亡机制；并在慢性高眼压动物模型中评价这种新型局部给药系统的作用效果及安全性等。该给药系统和两种药物单剂、复合制剂的应用，能有效提高视网膜局部的药物浓度，减少全身毒副作用，延缓或阻止青光眼视神经损害的发生发展，给青光眼患者带来更有效的治疗，减少其致盲率，为患者复明带来新的希望。

青光眼是因视网膜神经节细胞及视神经损害而致盲的眼病，但视网膜神经节细胞及视神经损害，仍是当今青光眼治疗还未解决的难题。因此，开发更多视神经保护药物，寻求更有效给药途径是本课题的研究目的。本课题拟通过研究注射用鼠神经生长因子（mNGF）、白蒺藜皂苷（GSTT）、人参皂苷Rg1对视神经的保护治疗作用，并同时开发一种新型超声微泡介导的眼科局部给药系统及在慢性高眼压动物模型中评价这种新型局部给药系统的作用效果及安全性。结果显示：1、通过体外细胞实验，我们发现mNGF、GSTT、人参皂苷Rg1能促进体外视网膜神经节细胞的存活，增强其活性；2、通过观察在不同超声声强、辐照时间下，超声微泡对正常兔视网膜组织病理形态学和视网膜超微结构的影响，筛选出适用于兔视网膜给药的理想超声参数，为超声声强为0.5W/cm2，辐照时间为30s、60s；3、观察玻璃体腔注射不同浓度的GSTT、人参皂苷Rg1，在不同时间点观察GSTT及人参皂苷Rg1对兔视网膜组织形态和的超微结构的影响，发现兔眼玻璃体腔注射GSTT的浓度在1mg/kg、3mg/kg和5mg/kg，及人参皂苷Rg1的浓度在2.5mg/kg 0.1ml时，对兔眼视网膜各层组织包括神经节细胞及其视神经未产生毒副作用；4、通过构建兔高眼压视神经损害模型，将微泡与视神经保护药物联合，并在超声的局部照射下，观察超声微泡介导视神经保护药物对高眼压兔视神经损害的治疗作用，发现：超声微泡介导视神经保护药物mNGF、GSTT、人参皂苷Rg1治疗高眼压兔视神经损害是安全有效的；兔活体F-VEP检查示，高眼压组较正常组潜伏期延长，振幅降低，mNGF处理组较高眼压组潜伏期缩短，振幅升高，而超声微泡介导mNGF处理组较单纯mNGF处理组潜伏期更加缩短，振幅升高；光镜及电镜下观察兔视网膜、视神经，超声微泡与药物联合治疗可减少因高眼压模型造成的细胞损伤；超声微泡介导视神经保护药物通过改变视网膜内Bcl-2、Bax、NO、MDA、SOD、谷氨酸对高眼压兔视神经损害发挥保护作用；5、通过研究兔眼玻璃体腔注射超声微泡联合mNGF后的眼内组织药物含量分布，显示出，玻璃体腔注射mNGF后，眼部各组织药物含量排序为玻璃体＞视网膜脉络膜＞视神经＞房水，超声微泡联合mNGF组较单纯mNGF组能使mNGF在房水、视网膜/脉络膜及视神经等眼内组织达到更高药物含量。