miRNA-126表达调控变应性鼻炎Th细胞分化机制研究

Allergic rhinitis (AR) is one of the most common illnesses caused by genetic and environmental interaction.Th, Treg differentiation is the core pathogenesis in AR development.The AR prevalence of Han significantly higher than the uighurs in xinjiang, may be related to the Uighur Th, Treg key INF-γ, IL-4 genes expression and epigenetics methylation differences.Our research team findings showed that miRNA-126 up expression correlation with Th，Treg cells key genes INF-γ, IL-4 et.al. Our research found methylation inhibitors could adjust miRNA-126 expression and Treg differentiation in animal models. We speculate that the methylation of miRNA-126 gene and it’s differentially expression regulating Th cell differentiation in CD4+T cells of Uygur and Han AR patients in Xinjiang. In this study, The expression of miRNA-126 of Uygur and han patients with AR and it's regulation on Treg and Th cells differentiation associated genes methylation are tested by modern molecular technology respectively in animal models, human and in vitro cultured T cells by miRNA-126 vector, inhibitor intervention, to analyze the pathogenesis of Uighur and Han AR patients. This study will elucidate the pathogenesis and provide new therapeutic targets of Uygur and Han AR patients in Xinjiang.

变应性鼻炎（AR）是一种由遗传和环境共同作用的常见多发病，Th、Treg细胞分化是其核心发病机制。新疆汉族AR患病率明显高于维吾尔族，可能与维吾尔族Th、Treg关键基因INF-γ、IL-4等表达及表观遗传学甲基化差异有关。课题组最近研究发现维、汉AR患者CD4+T中miRNA-126高表达与Th细胞因子INF-γ、IL-4相关；甲基化酶抑制剂可调节AR动物模型外周血CD4+T细胞miRNA-126表达及Treg分化，由此我们推测新疆维、汉AR患者miRNA-126表达与甲基化可能存在交互作用，影响AR发生发展。本研究通过现代分子生物技术检测维、汉民族AR患者miRNA-126表达及甲基化差异，同时在动物模型及细胞水平其分析其对Treg及Th细胞分化及相关基因表达的影响，探讨miRNA-126在AR发病中的分子调控机制。本研究将为阐明新疆维、汉民族变应性鼻炎发病机制及新的治疗靶点提供依据。

本课题围绕“miRNA-126表达调控变异性鼻炎Th细胞分化的机制”这一科学问题，从细胞、动物模型、临床病例三个层面，免疫调控、甲基化和环境差异多角度，运用多种研究方法包括基因干预技术、过表达表达、细胞培养、流失细胞分析、甲基化测序、定量 RT-PCR等，深入开展研究工作 。研究发现在新疆变应性鼻炎患者及正常对照人群中AR患病组miR-126表达显著高于正常组；IFN-γ , IL-4 ,GATA3 ,ROR-γ 在AR患病组的表达显著高于正常组；Foxp3在AR患病组的表达显著低于正常组。. 在细胞水平通过 RT-qPCR 检测不同浓度5-aza干预Jurkat细胞后，干预后miR-126表达水平升高，随着浓度升高表达降低；IFN-γ、GATA3、ROR-γ、Foxp3 mRNA在5-aza低浓度下表达升高；随着5-aza浓度的升高，IFN-γ、GATA3、ROR-γ、Foxp3 mRNA的表达随之增加。通过流式细胞术检测5-aza干预Jurkat细胞后Th1/Th2和Th17/Treg的细胞比例，甲基化酶抑制剂干预后，Th1细胞亚群比例相对于正常组表达下降；Th2细胞亚群在5-aza干预后比例升高；Th17细胞亚群相对于正常组比例降低；Treg细胞亚群在5-aza干预后比例升高，在高浓度时差异有统计学意义。. 在动物水平通过Western Blot检测miR-126模拟物和抑制剂干预AR大鼠后IFN-γ、IL-4、GATA3、ROR-γ蛋白表达在AR组、AR转染控制组中表达显著升高，在miR-126模 拟物干预后表达显著降低；在miR-126抑制剂干预后，IFN-γ和IL-4蛋白相对于miR-126模拟物组表达升高，GATA3和ROR-γ蛋白相对于miR-126模拟物组表达降低；Foxp3蛋白在AR组、AR转染控制组中表达明显降低，在miR-126模拟物干预后表达显著升高，在miR-126抑制剂干预后明显降低。