靶向阻断诺如病毒结合HBGAs受体的中药活性成分筛选

诺如病毒（Norovirus, NoV）胃肠炎的暴发流行带来了沉重的医疗负担和社会公共卫生问题，迄今为止，尚缺乏针对诺如病毒的有效抗病毒药物和疫苗。本研究拟以NoV入侵人体的主要致病蛋白VP1及其所识别的人类组织血型抗原（HBGAs）受体为主要研究对象，克隆表达我国NoV流行优势株 GII-4型毒株病毒样颗粒（VLPs），采用凝集抑制实验法测定唾液HBGAs受体分型（A、B、H），建立NoV VLPs结合唾液HBGAs受体的酶联免疫实验（EIA）中药筛选模型。结合中医药抗病毒性腹泻理论和临床文献确立待筛选的候选中药（包括复方）品种，利用高效液相色谱法(HPLC)制备分离建立天然化合物精分离物库，并利用此模型进行高通量抗NoV中药化合物筛选。高亲和力特异性的阻断GII-4型毒株结合HBGAs受体的中药及其有效成分的获得，将为开发防治我国诺如病毒胃肠炎暴发的有效药物提供重要的科学依据。

诺如病毒（Norovirus, NoV）是全球范围内引起成人和儿童非菌性急性胃肠炎暴发流行的重要病原体，同时也是婴幼儿散发性胃肠炎的常见病原（仅次于轮状病毒）。据统计，发达国家每年因NoV暴发感染而导致约90万儿童致病，其中6.4万人需住院治疗，发展中国家每年因NoV感染而死亡的5岁以下儿童高达21.8万人。由于缺乏体外细胞培养系统和合适的动物感染模型，长期以来抗NoV胃肠炎的药物研究进展缓慢。本项目成功克隆表达出我国NoV流行优势株 GII-4型毒株的衣壳蛋白（病毒样颗粒，VLPs）和P蛋白（P颗粒PP和P二聚体PD），建立了NoV-VLPs和P蛋白（PP/PD）结合唾液HBGAs受体的酶联免疫（EIA）药物筛选模型，通过对近50余种临床有效的抗病毒性腹泻中药的筛选，首次发现了具有显著阻断NoV结合HBGA受体作用的中药五倍子和石榴皮及其有效成分单宁酸。在基于分子对接技术的计算机高通量虚拟筛选ZINC化合物库得到256个化合物的基础上，通过生物学活性验证得到了19种显著阻断NoV结合HBGA受体作用的先导化合物。此外,我们将表达的NoV P颗粒免疫来航鸡从鸡蛋中成功分离纯化得到大量抗NoV抗体(IgY)，其抗体滴度高、产量大，具有在胃肠道中稳定性好、成本低廉等特点，为NoV感染的被动免疫治疗提供了广阔的应用前景。课题共发表SCI收录论文3篇，国内核心期刊5篇。接收修回待发表SCI收录论文和中文核心期刊各1篇。参加第30届美国病毒学年会并进行大会学术交流和壁报展示2次。超额完成了既定的研究目标。