CD5L/CD36在肝脏巨噬细胞参与肝损伤炎症反应中的功能机制研究

Hepatic macrophages play a crucial regulatory role in liver injury and inflammation. However, the key molecules and pathway involved remain unclear. Our previous findings and preliminary data show that hepatic macrophages are the main sources of CD5L which is a key molecule related to inflammation. Using yeast-two hybrid technique, we found that some candidate proteins could interact with CD5L including insulin-like growth factor binding protein (IGFBP) family members. Further, the expression of CD5L and its receptor CD36 changed significantly in a mouse model of liver injury. Moreover, CD36 knockout mice presented less injury compared with wild type mice. We hypothesize that hepatic macrophages derived CD5L regulates cell apoptosis and inflammation through its interactive proteins. The receptor CD36 may be involved in liver injury and inflammation via this signaling pathway. The current project is focused on understanding the effect of CD5L and its interactive proteins on cell apoptosis and inflammation; investigating the role of CD5L and its receptor CD36 on liver injury and repair; analyzing the clinical correlation between hepatic injury and CD5L or its interactive proteins. Our study will provide novel diagnostic and therapeutic strategies and theories for liver injury.

肝脏巨噬细胞在肝损伤炎症反应中发挥重要的调节作用，涉及的关键因子和通路仍未完全清楚。前期工作中我们发现，肝脏中涉及炎症反应的重要分子CD5L来源于巨噬细胞；应用酵母双杂交技术，我们筛选到某些与CD5L相互作用的蛋白，其中包括胰岛素样生长因子结合蛋白家族成员（IGFBPs）；利用小鼠肝损伤模型，我们观察到CD5L及其受体CD36的表达均发生显著变化，并且CD36基因缺陷小鼠的肝损伤明显低于野生型小鼠。我们假想肝脏巨噬细胞通过分泌CD5L，作用于IGFBPs或其它反应蛋白，调控细胞凋亡和炎症反应；同时CD5L受体CD36能够接受刺激信号，参与肝损伤炎症反应过程。本项目拟进一步探索CD5L与其作用蛋白调节细胞凋亡和炎症反应的功能；探究CD5L与其受体CD36在肝脏损伤修复中的作用；同时检测分析CD5L及其作用蛋白与肝损伤的临床相关性。本研究将为肝损伤的诊断治疗提供新的策略及理论基础。

CD5样（CD5L）基因属于B类清道夫受体富含半胱氨酸结构域超家族，在维持免疫稳态和炎症疾病中发挥关键作用，而其受体CD36是一个典型的模式识别受体，能够结合病原体和自身来源的聚阴离子配体，是炎症小体的关键调节者。本项目利用免疫性和药物性肝损伤模型，研究这两个分子在肝损伤及炎症反应中的功能。内容包括：①构建CD5L基因缺陷小鼠；②研究CD5L和其受体CD36分子在对乙酰氨基酚（APAP）诱导的急性肝损伤中的作用；③研究CD36分子在免疫性肝损伤中的作用。取得以下重要结果：.(1)成功构建CD5L基因敲除小鼠；.(2)在APAP诱导的小鼠急性肝损伤模型中，野生型（WT）小鼠肝脏中的CD5L分子表达显著增高，集中在中央静脉区；与WT小鼠相比，CD5L基因缺陷小鼠肝损伤明显减轻，但与APAP代谢酶CYP2E1的表达无关；同时，CD5L-/-小鼠肝脏中，磷酸化ERK的表达明显减少，KC、IL-6、MCP-1和MIP1α mRNA水平显著降低，血清中IL-6水平减少，肝脏中性粒细胞减少，而浸润巨噬细胞显著增多；.(3)在植物刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠免疫性肝损伤模型中，CD36基因敲除小鼠比WT小鼠肝损伤程度降低，肝脏单核细胞包括CD4+、CD8+ T细胞、NK、NKT细胞、浸润性巨噬细胞和中性粒细胞减少，炎症因子TNF-α、CXCL10、IL-1α、MCP-1和IL-6表达降低。嵌和小鼠实验显示，非造血性细胞上表达的CD36起重要作用。同时，CXCL10通过CD36诱导肝细胞凋亡，激活IKK、Ak和JNK。利用CD36信号通路Lyn抑制剂染料木素能够减轻ConA引起的小鼠肝损伤；.(4)在APAP模型中，WT小鼠肝脏中的CD36分子表达显著增高，主要集中在中央静脉区；与WT小鼠相比，CD36基因缺陷小鼠肝损伤减轻，与APAP代谢产物的多少和代谢酶CYP2E1的量无关；同时，CD36-/-小鼠肝脏中，JNK的激活降低，肝脏细胞坏死区明显下降， KC、IL-6和IL-1β mRNA水平显著降低，血清中IL-1β水平减少，而小鼠肝脏的浸润巨噬细胞和中性粒细胞减少，应用CD36信号通路抑制剂PP1能显著减轻APAP诱导的肝脏损伤。.本研究揭示CD5L及受体CD36在肝损伤及炎症反应中发挥重要作用，为肝损伤的治疗提供了新的手段和靶点。