miRNA34b/c在鼻咽癌发生发展中的抑瘤功能及其表达调控机制的研究

鼻咽癌的MicroRNA差异表达谱分析提示miRNA34b/c在鼻咽癌中表达明显下调，与正常组织相比具有7倍以上的差异。miRNA34b/c定位于11Q23.1，此染色体区段在鼻咽癌中存在着高频的丢失。同时miRNA34b/c启动子区位于CpG岛，在肺癌中其表达水平的下降与肺癌转移和预后密切相关。因此我们提出miRNA34b/c在鼻咽癌中具有潜在抑制肿瘤增殖和转移的功能，其表达水平受甲基化、染色体丢失调控的科学假说。为验证假设，首先检测miRNA34b/c在鼻咽癌中的表达规律，并分析与患者转移与预后的相关性；其次研究该分子在体内、外对鼻咽癌细胞恶性表型的影响；最后通过检测染色体杂合性丢失（LOH）、启动子区甲基化修饰程度的改变来初步探索miRNA34b/c在鼻咽癌中下调的分子机制。深入研究miRNA34b/c在鼻咽癌中的功能及表达调控将为阐明鼻咽发生发展机制提供新的理论依据和实验证据。

在青年基金项目的支持下，我们首先扩展课题对鼻咽癌标本进行了microRNA芯片分析，共发现了48个在癌与非癌中差异表达的microRNA。随后利用独立样本的RT-PCR结果证实miR-34b/c的表达水平与鼻咽癌临床分期具有相关性。与正常鼻咽组织比较，鼻咽癌组织miR-34b/c表达水平明显降低，且临床III期和IV期鼻咽癌中miR-34b/c的表达低于临床II期。细胞实验证实miR-34b和miR-34c-3/5p mimics能够明显抑制鼻咽癌细胞生长，阻滞于G1期。Transwell实验和划痕实验说明miR-34b和miR-34c-3/5p mimics能够抑制鼻咽癌细胞的迁移。裸鼠成瘤实验显示在体内miR-34b/c同样抑制鼻咽癌细胞生长。miR-34b/c在鼻咽癌中扮演了抑瘤基因的角色。.为了研究鼻咽癌中miR-34b/c表达水平下降的机制, 我们首先针对11q23-24区段miR-34b/c附近选择多个微卫星位点，利用鼻咽癌标本及其配套血液标本进行LOH分析，未发现等位基因的杂合性丢失。RT-PCR检测显示去甲基化处理引起miR-34b/c表达水平的升高。选取鼻咽癌细胞HNE1和CNE1及对照的NP69鼻咽上皮细胞，10例鼻咽癌组织及4例慢性鼻咽炎性组织进行了亚硫酸氢钠测序（BSP）分析，结果表明与NP69及慢性鼻咽炎性组织相比，在鼻咽癌细胞和组织中miR-34b/c基因启动子区存在高密度的甲基化位点，认为鼻咽癌中miR-34b/c启动子区高甲基化导致其低表达水平。.另外对鼻咽癌促瘤microRNA进行了研究，证实miR-18a在鼻咽癌中高表达，下调Dicer1，在体内、外miR-18a均能促进鼻咽癌细胞的生长、迁徙与转移。转染miR-18a的鼻咽癌细胞具有EMT样表型改变，且伴随E-cadherin和K-Ras表达水平的升高。