自噬途径在大黄素改善高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝中的作用

最新的研究表明自噬途径在肝脏的脂质代谢中起着重要作用，以自噬为靶点的药物研究有望为非酒精性脂肪肝的防治提供新的治疗手段。本项目前期研究发现中药单体大黄素对糖脂代谢的调节与我们之前报道的小檗碱的效应有相似之处- - 抑制氧耗和脂解、抗炎、激活AMPK。有鉴于最新发现的AMPK激活对自噬途径的正向调控作用，在此基础上，我们运用腺病毒介导的RNA干扰及其他分子生物学手段，结合形态学的观察，在细胞和动物整体水平观察自噬途径是否介导了大黄素对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝的改善作用，并寻找大黄素作用的潜在分子靶点，同时也为类似药物的筛选提供可借鉴的思路和技术平台。

自噬（autophagy）是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性的降解途径，自噬途径在肝脏的脂质代谢中起着重要作用，以自噬为靶点的药物研究有望为非酒精性脂肪肝的防治提供新的治疗手段。本课题首先在肝细胞及脂肪细胞上建立起较为完整的自噬测定方法，包括慢病毒介导的成熟脂肪细胞及肝细胞GFP-LC3的荧光点状聚集、电镜下观察自噬泡的结构以及自噬通量的检测。其次发现了自噬相关蛋白Beclin 1在肝细胞及脂肪细胞中所起的重要作用，并以Beclin 1为切入点，用慢病毒介导的过表达/knockdown系统，观察了自噬活动的激活/抑制如何调控脂代谢。在此基础上，本课题观察了中药有效成分大黄素对肝细胞自噬及脂代谢的调控作用，发现大黄素可以通过激活AMPK途径，促进细胞自噬，并调节肝脏的糖脂代谢，改善脂质的过度沉积。为了在整体水平观察自噬途径如何调控肝脏的脂代谢以及中药的干预作用，我们摸索出一套相对稳定的肝脏组织自噬通量的检测方法，即小鼠腹腔注射溶酶体抑制剂氯喹，Western 观察LC3蛋白的表达变化，在此基础上，我们以长期高脂喂养小鼠为模型，观察一些中药对肝脏自噬的调控及对脂代谢的影响，明确大黄素通过增加自噬作用，促进肝脏脂质分解。该项目的实施，对于探索NAFLD的新机理和发现抗NAFLD的新靶标具有重要意义，也将为此类药物的筛选提供可供借鉴的思路和技术平台。本申请课题目前已发表SCI收录论文2篇，获得自噬方法建立相关专利1项，培养硕士研究生2名。