胶质瘤中miR-93的转录调控及其促细胞周期进展的新机制

胶质瘤是神经系统最常见的难治性肿瘤，存在多种异常表达miRNA。我们前期研究发现miR-93在胶质瘤中异常高表达，其表达受EGFR/STAT3信号通路调节。抑制miR-93可抑制胶质瘤细胞周期进展。 Rb家族成员RBL2/p130这一重要的细胞周期负调控因子是miR-93的潜在靶点。故我们提出EGFR/STAT3转录调控miR-93靶向RBL2/p130调节细胞周期的新机制，拟通过1.CHIP-PCR技术验证STAT3对miR-93的直接转录调控作用；2.荧光素酶实验验证RBL2/p130是miR-93的直接作用靶点；3.miR-93和RBL2/p130恢复实验验证miR-93靶向RBL2/p130在EGFR/STAT3激活的细胞周期进展中的作用。本研究可阐明胶质瘤中EGFR/STAT3信号通路转录调控miR-93而异常激活细胞周期的机制，为胶质瘤的靶向基因治疗提供新靶点。

微RNA（micro RNA, miRNA)依然是目前分子生物学研究领域的一个热点和难点。实验已证明其中许多miRNA在生物体发育，疾病发生发展的过程中发挥着重要作用。因为缺乏精确的预测miRNA的调控靶基因的方法，依然需要大量的生物学实验来明确与疾病相关的miRNA的下游靶基因及其通过靶基因参与疾病发生发展过程的机制。.通过本项目的研究，我们明确了RB家族成员中，只有RBL2受到miR-106b、-93的直接靶向调控。并验证了miR-106b、-93通过抑制RBL2蛋白的表达进而影响细胞周期进展相关因子E2F1、CyclinD1、p21的表达而影响胶质瘤细胞的增殖。.我们通过体内实验验证了靶向抑制miR-106b、-93后，异种移植小鼠荷载的LN229胶质瘤的生长被明显抑制。Western blot和石蜡切片的免疫组织化学检测显示肿瘤组织内细胞周期进展相关蛋白，在miR-106b、-93被抑制后受到调控，进而影响肿瘤组织的生长。细胞增殖指标PCNA也在miRNA被抑制时表达降低，表明细胞增殖能力减弱。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况，结果显示，miR-106b、-93抑制剂治疗后可引起胶质瘤组织内细胞大量凋亡。.另外，我们建立了裸鼠颅内异种胶质瘤原位模型，并运用该模型通过荧光素酶活性检测评估了反义miR-93裸鼠颅内抑制胶质瘤生长的作用。结果显示，反义miR-93慢病毒感染过的U87细胞颅内成瘤速度明显慢于阴性对照组，且总体生存期长于对照组。.我们进一步进行了miR-93表达的转录调控研究。明确了，miR-93转录调控过程中STAT3并非占主导作用，可能存在其他未知因素影响miR-93的表达。通过对TCGA数据库中胶质母细胞瘤标本的RNA测序结果的分析，我们发现MYC基因与miR-93在不同胶质母细胞瘤标本中有着相似的表达水平，初步推断miR-93的表达可能受MYC基因调控。我们发现在胶质瘤细胞中转染外源c-MYC基因后，miR-93的表达可被明显诱导。.通过本研究我们明确了miR-93通过靶向细胞周期抑制因子RBL2/p130促进胶质瘤细胞周期进展的机制，并发现转录因子STAT3并非调控miR-93的表达的关键转录因子，而c-MYC基因可能在miR-93表达的转录调控过程中发挥重要作用。