p68调控MDM2/p53信号途径在肺动脉高压肺血管重塑中的作用及机制研究

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a severe pulmonary vascular disease that is associated with extremely high mortality. Deeper understanding of its biological mechanism may provide novel strategies for clinical therapy. Previously, we have observed significantly elevated expression of p68 protein in the remodeled pulmonary arteries in PAH. Furthermore, knockdown of p68 in pulmonary arterial smooth muscle cells significantly prompted cell proliferation and migration. p53 pathway plays an important role in PAH and smooth muscle cell proliferation, and prior studies have shown that p68 might be a positive regulator of p53 signaling. In combination with the recent progresses in the field of PAH, we hypothesized that p68/MDM2/p53 pathway might be aberrantly suppressed, and played an important role in pulmonary arterial smooth muscle cell proliferation and migration, which further contributed to vascular remodeling. In this project, we planned to first evaluate the transcription and expression levels of p68 and MDM2/p53 signaling using RT-PCR and immunohistochemical analysis. Second, we would establish p68 knock-out mice, hypoxic pulmonary arterial hypertension animal modle, p68 kncokdown and overexpression vascular smooth muscle cells, and further study the role of p68 in vascular remodelling and smooth muscle cell proliferation and migration. The results might bring new targets for clincal therapy for PAH.

肺动脉高压是致死率极高的恶性肺血管疾病，深入研究其发生、发展的生物学机制将为临床诊治提供新思路。在前期工作中我们发现：重要的核转录因子p68在重塑肺血管中呈低表达，而敲低p68显著促进肺血管平滑肌细胞（VSMC）增殖、迁移，提示p68在肺动脉高压肺血管重塑中可能具有重要的调控作用；结合p68信号通路及肺血管变构的分子机制，我们推测：p68可能通过调控MDM2/p53信号途径参与肺动脉高压肺血管重塑进程。本课题组拟采用定量RT-PCR、免疫荧光等方法检测比较重塑肺血管组织和低氧刺激VSMC中p68、MDM2/p53通路分子的转录、表达；构建p68血管条件性基因敲除小鼠肺动脉高压模型及p68过表达和低表达VSMC体系，通过检测血流动力学、血管重塑及细胞增殖、凋亡等，明确p68在肺动脉高压进程中的调控作用及具体机制。研究结果有望进一步揭示肺血管重塑的分子机制，为肺动脉高压的临床诊疗提供新靶点。

在动脉粥样硬化等血管变构疾病发展过程中，新生内膜增厚和血管管腔狭窄是最主要的表现形式，严重者可造成动脉血管闭塞。血管平滑肌细胞的异常增殖和迁移是造成血管内膜增厚和动脉管腔狭窄的主要原因。因此，深入研究血管平滑肌细胞的增殖机制，探索抑制平滑肌细胞增殖的基因，可为血管变构等疾病的靶向治疗奠定理论基础和依据。.RNA解旋酶（RNA helicases）是一个包含了与RNA代谢（从翻译起始、核糖体形成、前mRNA拼接和mRNA降解）的许多方面有关的蛋白质家族。DEAD-box是RNA解旋酶家族中最大的成员，它不仅仅在调节RNA结构方面起作用，对于细胞生长和组织发展也发挥了重要的调节作用。因此，探索RNA解旋酶家族在维持血管生物学效应中发挥的重要作用仍有待研究。.本研究结果表明，在DEAD-box家族中，以DDX5的表达量最高，主要表达在血管组织中。在PDGF-BB 等细胞因子刺激细胞增殖的过程中，DDX5的表达量随着PDGF-BB刺激的剂量的增加和时间的延长而降低。DDX5缺失可刺激VSMC的增殖和迁移，反之，DDX5过表达可抑制VSMC的增殖。机制研究表明，DDX5可与转录因子GATA6相结合，抑制GATA6的降解而对GATA6的表达有正调控作用。CHIP结果显示，GATA6可与p27kip的启动子区结合，DDX5通过增强GATA6可与p27kip的启动子区结合来达到抑制vsmc增殖的效果。.本研究首次揭示了RNA解旋酶家族在抑制血管增殖、迁移和内膜增生中的作用，同时扩展了RNA解旋酶的非解旋功能，对于血管疾病的治疗提供新的思路。