非转移细胞1蛋白（NM23A)对阿片依赖的调节作用

Opioid dependence is a kind of chronic,recurrent brain disease and the biology mechanism has not been completely clarified.So medical intervention methods are deficient. We have found a new protein -NM23A which was likely related with opioid addiction through comparative proteomic research and was differentially expressed in different encephalic region during opioid dependence pathological process. Researches about the action of NM23A on opioid dependence pathological process have not been reported yet. Our research is to observe the time course expression of NM23A during opioid dependence pathological process and then to study possible molecular mechanism of NM23A on opioid dependence regulation with cells model and animal model from compensatory adaption angle of opioid receptor and postreceptor signal transduction. Our aim of this reseach is to clarity the regulation effect of NM23A on opioid dependence and to discuss the possibility of NM23A to be a new candidate molecular for opioid dependence intervention treatment.

阿片依赖是一种慢性、反复发作性脑疾病，目前生物学机制尚未完全阐明，缺乏有效的医学干预手段。我们前期的比较蛋白质组学研究发现了一种新的可能与阿片依赖相关的蛋白-NM23A，并发现其在阿片依赖过程具有脑区差异表达。NM23A在阿片依赖病理过程中有何作用迄今为止国内外尚未见报道。本项目旨在前期工作基础上，研究阿片依赖病理过程不同阶段NM23A的时程表达特征；并以此为基础，通过分子生物学手段，分别在细胞模型与整体动物模型从阿片受体及受体后信号转导功能的代偿性适应角度进一步研究NM23A调节阿片依赖的可能分子机制。本项目的开展有望阐明NM23A对阿片依赖的调节作用，探讨NM23A成为阿片依赖干预治疗新的候选分子的可能性。

目的： NM23A蛋白是一类自然界分布广泛的多功能蛋白，存在于几乎所有的生物与细胞中。除具有二磷酸核苷激酶活性外，NM23A蛋白在体内还参与信号转导、基因调节、细胞生长发育等生理过程，在肿瘤发病、转移过程以及中枢神经系统发育及疾病发生过程也发挥重要作用。前期蛋白质组研究结果发现NM23A在吗啡依赖大鼠不同脑区表达量发生变化。因此，本研究目的为观察该蛋白是否在阿片依赖过程中发挥作用并探讨其可能机制。.方法：采用蛋白免疫印迹实验观察NM23A蛋白在吗啡依赖大鼠不同脑区与时程的差异表达。建立大鼠吗啡依赖模型，根据蛋白免疫印迹实验与戒断症状评分观察NM23A在依赖与戒断不同时程海马区表达差异以及戒断症状与体重变化。应用Sfold、Mfold以及RNAstructure等软件设计针对NM23A的反义寡核苷酸（ASODN），以SH-SY5Y细胞作为筛选模型确定可有效下调NM23A蛋白表达的ASODN，并观察NM23A下调后对cAMP的影响。通过海马区埋管微量注射ASODN的方法观察整体动物海马区NM23A表达量下调对吗啡躯体依赖大鼠戒断行为表达的影响。在CHO-μ细胞下调NM23A表达观察μ阿片受体磷酸化、表达量和亲和力的影响，并测定PKA、CREB含量以观察NM23A低表达对阿片受体后信号通路代偿性适应的影响。.结果：（1）NM23A在吗啡依赖大鼠海马、纹状体等脑区具有差异表达。（2）在大鼠吗啡依赖与自然戒断模型NM23A在海马区具有时程差异表达，但在大鼠CPP模型无表达变化。（3）设计并筛选出可有效下调SH-SY5Y细胞基因与蛋白表达量的ASODN，对蛋白的下调作用可持续48h，蛋白下调量至对照组的35%；可引起SH-SY5Y细胞基础cAMP水平的显著降低。（4）大鼠海马区微量注射ASODN使NM23A表达量下调后，可引起吗啡依赖戒断症状的显著增强。提示该蛋白与大鼠躯体依赖有一定相关性。（5）在CHO-μ细胞NM23A下调后不影响MOR的表达量和亲和力，也不影响PKA与CREB的活性与含量。.结论：NM23A在吗啡依赖过程有脑区与时程差异表达，可影响躯体依赖戒断症状；该蛋白在细胞水平可影响cAMP的表达，但并未发现其对阿片受体及 cAMP信号通路其它关键分子的影响。相关机制有待进一步研究。