脂质体液膜萃取技术的构建及其用于中药活性成分筛选与膜通透性评价的研究

Being a new way of improving the efficiency of screening active components of Chinese medicine, it is worth to study the separation method of absorbed components of Chinese medicine and formulas in vitro, from which active components can be further seperated. Based on the feature of liposome, A new liposome liquid memrane extraction technology(LLMET) is established in this project to separate the components absorbed by passive diffusion (used for efficacy evaluation and screening of active ingredients), and evaluate the biomembrane permeability of known active components from Chinese herbal extract, which can provide reference for dosage form design. The project includes three parts. First, preparation methods of LLMET and factors that influence the effect of seperation and enrichment are studied using Xiangfu Siwu Decoction as drug model. Second, pharmacological effects of extract are evaluated using isolated mouse uterus contraction model, and then active components from the extract are screened combined with column chromatography. Finally, the relevance between characteristic parameters of known components from LLMET, Pharmacokinetic parameters and Papp from Caco-2 and situ rat intestinal models is studied.We wish the demonstration research can lay the foundation for the application of LLMET in Chinese medicine.

研究中药及其复方可吸收组分和不吸收组分的体外分离方法，再从可吸收组分中筛选药效成分，是一种值得探索的提高中药活性成分筛选效率的新思路。本课题根据脂质体具有类似生物膜结构和液膜结构的双重性质，拟建立一种以脂质体为分离介质的液膜萃取新技术，用于体外分离中药中具有膜通透性可被动扩散吸收的组分（供药效评价与活性成分筛选用），并拟用于中药复方复杂体系已知活性成分膜通透性的高通量评价，为剂型设计提供参考。以香附四物汤为模型药物，研究脂质体液膜萃取系统的制备方法，探讨影响分离与富集效果的关键因素；采用离体小鼠子宫痛经模型等评价萃取物的药理效应，并结合柱层析等分离方法从萃取物中筛选活性组分。研究复方中已知成分的脂质体液膜萃取特征参数与药动学参数和Caco-2细胞模型表观渗透系数的相关性。通过香附四物汤的示范性研究，为脂质体液膜萃取技术在中药领域的推广应用打下基础。

根据脂质体具有模拟生物膜结构和液膜结构的性质，建立了一种以脂质体为分离介质的液膜萃取技术，将其用于香附四物汤水提液中具有生物膜通透性可被动扩散吸收组分的体外分离，并对可吸收组分进行了药效学评价、化学成分定性分析和分子对接虚拟药理学研究：①制备硫酸铵和醋酸钙脂质体，构建了弱碱性药物和弱酸性药物的脂质体液膜萃取系统，并分别探讨了影响萃取率的因素。以优选的最佳工艺参数对香附四物汤中活性成分进行筛选和富集，结果生物碱和阿魏酸脂质体液膜萃取率分别达50%和40%以上。② HPLC指纹图谱和UPLC-Q-TOF-MS定性分析结果表明，脂质体液膜萃取技术可筛选和富集到香附四物汤中具有生物膜通透性的生物碱和有机酸类成分，已鉴定的23个成分在脂质体液膜萃取物中也同时存在，提示其具有一定的生物膜通透性。③对缩宫素诱导小鼠离体子宫收缩功能的影响及对大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响结果表明，脂质体液膜萃取技术筛选和富集到的成分可以代表香附四物汤的主要药效物质基础。④香附四物汤中31个具有生物膜通透性的活性成分具有较好的结构多样性分子特征，与气滞血瘀型原发性痛经相关的17个靶点虚拟对接结果表明，31个成分与效应靶点结合较好，参与构成香附四物汤中治疗气滞血瘀型痛经的药效物质基础，其通过多靶点、多途径发挥药效作用。基于膜通透性组分与口服吸收成分具有良好相关性，将中药膜通透性组分作为中药药效成分筛选和药理活性评价的对象，为中药药效物质筛选与辨识提供了新的思路和方法。.此外，还将其用于香附四物汤水提液中已知活性成分膜通透性的评价：香附四物汤与脂质体的相互作用结果表明，7种活性成分可能以被动扩散的方式透过磷脂膜，其结果与大鼠在体单向肠灌流和Caco-2细胞实验结果一致。采用脂质体液膜萃取方法，通过测定脂质体液膜萃取率，评价中药水提液中活性成分的膜通透性是可行的。该方法可实现对多组分一次性、同时的高通量评价，可为中药水提液中药物筛选、剂型设计和口服吸收机制研究提供参考。