基于“线粒体自噬”探讨补青颗粒对db/db小鼠早中期糖尿病性白内障的影响及分子机制研究

Diabetic cataract (Diabetic Cataract,DC) to lens opacity as the main feature is a major late complication of diabetes,and osmotic swelling of the lens is relatively reversible early pathological mechanism of DC,and its pathogenesis is not fully understood.The latest research results show that:"autophagy"(Autophagy) is closely related to the development of diabetes,and the "mitophagy" is the main way of the lens cells.Therefore,we believe that:" mitophagy" related gene therapy may become a new target for early and mid DC.On the basis of relevant studies,to clarify up BUQING Particles on the lens early and mid type 2 Diabetic mice the effects and mechanisms,through the issue of organ damage model and cell damage model,by using molecular biology,fluorescent probes,laser total focus and other advanced techniques,from organ-cell-molecular level,the regulation was observed up BUQING Particles "mitophagy" related signal transduction pathways,and mechanisms of action to intervene early and mid-crystalline epithelial cells of diabetic mice.

糖尿病性白内障（Diabetic Cataract，DC）以晶状体混浊为主要特征，是糖尿病晚期的主要并发症，而晶状体的渗透性膨胀是DC早期相对可逆的病理机制，其发病机制尚未完全阐明。最新研究结果显示：“自噬”（Autophagy）与糖尿病的发生发展密切相关，且“线粒体自噬”是晶状体细胞的主要自噬方式。因此，我们认为：“线粒体自噬”相关基因可能成为治疗早中期DC的新靶点。在相关前期研究基础上，为阐明补青颗粒对早中期2型糖尿病小鼠晶状体的影响及作用机制，本课题分别通过器官损伤模型和细胞损伤模型，运用分子生物学、荧光探针、激光共聚焦等先进技术手段，从器官-细胞-分子水平，观察补青颗粒调控“线粒体自噬”相关信号转导通路，干预早中期糖尿病小鼠晶体状上皮细胞的作用及机制。

随着人类生产、生活方式不断的现代化，糖尿病的发病率也不断增加。以晶状体浑浊为主要特征的糖尿病性白内障是糖尿病中晚期的主要并发症，也是糖尿病患者的首要致盲因素。60%~65%的糖尿病患者好发白内障，且在全球尤其是低中收入国家的高发病率，给患者带来了巨大的困扰，严重的降低了患者的生活质量。除却已知的糖尿病最主要的并发症--视网膜病变，糖尿病性白内障已成为威胁人类健康的第二大眼病。中医药在眼部疾病防治方面有其独特理论和丰富经验，因此应用中医药在糖尿病性白内障可逆期进行干预，可以达到有效防治的效果。. 本项目在前期研究的基础上，分别从器官和细胞水平进行研究、分析。选db/db小鼠模拟II型糖尿病性白内障模型，给与补青颗粒和杞菊地黄丸灌胃，观察小鼠晶状体浑浊程度，用HE染色法检测db/db小鼠晶状体的病理变化，免疫组化法检测小鼠晶状体中自噬相关蛋白的表达；用H2O2诱导人晶状体上皮细胞（HLE）氧化损伤模型，含药血清干预后，采用CCK8法检测补青颗粒含药血清对HLE细胞活力的影响，划痕实验检测对迁移能力的影响，流式细胞术检测对细胞周期的影响。用Western blot和RT-PCR法检测相关蛋白和基因在HLE细胞中的表达。证实了补青颗粒对早中期糖尿病性白内障具有一定程度的保护作用，阐明了其通过上调LC3、Pink1、Bnip3、Nix、FUNDC1、AMPK蛋白的表达，下调mTOR、PI3K、Akt蛋白的表达，激活Pink1-Parkin、Bnip3/Nix、FUNDC1和AMPK-mTOR信号通路，抑制PI3K-Aktm-TOR信号通路，从而延缓糖尿病性白内障发生、发展的分子机制。为早中期糖尿病性白内障的发病机制及治疗靶向提供了新思路。