新型小分子化合物抗登革病毒感染机制的研究

蚊媒传播引起的登革热和登革出血热/登革休克综合征是急性传染病，严重者可致死。目前，世界上尚无有效疫苗和特效抗病毒药物可以预防和治疗此病。国际上对抗登革病毒（DV）复制化合物的研究趋于增多，但抑制活性强者寥寥。针对DV的复制过程，我们以传播最广泛的2型DV为靶标，利用建立的Dengue Replicon体系，结合高通量筛选方法，发现几类新结构骨架的小分子抑制剂。其中，以喹唑啉为母核的化合物抑制DV复制的活性具有高效低毒的特点，并最终确定以对DV体外抑制活性达到nM级的1157为候选化合物进行深入研究。本项目拟进一步分析其抗DV分子作用机制，进而探索其在动物水平上的抗DV复制活性，为开发低毒、高效、选择性好的DV抑制剂提供科学依据、奠定研究基础。同时，以此为契机，深入研究登革病毒在动物模型体内的感染过程和机制。

本项目针对新型具有完全自主知识产权的抗登革病毒化合物进行了深入的研究。通过对高通量筛选技术获得的具有抗登革病毒活性的新型分子母核进行多样化合成和构效关系研究，我们确定了一个新型的喹唑啉类抗登革病毒化合物1157。利用多种分子生物学的技术手段，我们对化合物1157抗登革病毒的体外药效学及药理学特性进行了一定程度的深入研究。我们发现化合物1157对登革病毒感染宿主细胞的入胞及病毒基因组释放过程无影响、对登革病毒在宿主细胞内的子代病毒包装及子代病毒的成熟释放过程无影响、对登革病毒蛋白水解酶的活性没有抑制作用。化合物1157选择性的抑制登革病毒细胞内RNA复制复合体的功能，直接减少登革病毒RNA的复制，且对正链病毒RNA的合成具有更强的抑制作用，提示其可能对登革病毒RNA复制体中病毒聚合酶的功能抑制。为了跟好的了解化合物1157的体内抗登革病毒药效，我们引进并繁育了转基因小鼠品系AG129小鼠。该小鼠为干扰素受体缺陷的免疫缺陷小鼠。我们利用体外克隆重构的登革病毒临床株在AG129小鼠上建立了一个感染性登革病毒动物模型用于抗病毒化合物的药效学研究。实验结果显示化合物1157在该动物模型上能有效抑制登革病毒在小鼠体内的复制和扩增。显示了一定的体内抗病毒活性。本项目的实施为化合物1157作为抗登革病毒候选药物的研究提供了先期的研究结果，同时也为未来其他新型的抗登革病毒化合物的研究奠定了基础。