以循环肿瘤细胞为靶点的抗转移性乳腺癌先导物的发现及其作用机理研究

乳腺癌是女性癌症死亡的首要原因，其中绝大多数患者死于肿瘤的远处转移，但目前缺乏有效治疗措施。循环肿瘤细胞（CTCs）是存在于血液循环中的肿瘤细胞，在肿瘤的远处转移中起了关键作用，也是理想的抗转移靶点。前期，我们以乳腺癌细胞MDA-MB-231为对象，系统研究了金粟兰倍半萜成分的抗转移活性，发现数个具有一定体内、外抗转移活性的成分。机制研究显示，这些活性成分表现出不同的作用机制，而抑制CTCs的活性是其中之一。因此，本研究以循环肿瘤细胞为靶点，在金粟兰倍半萜中寻找具有CTCs抑制活性的抗转移先导物。首先，采用体内定向选择法建立循环肿瘤细胞模型，全面梳理金粟兰倍半萜的CTCs抑制活性，初步确定5-10个候选先导物；其次，采用多种体内、外模型验证其活性，确定1-2个以CTCs为靶点的抗转移先导物；最后，从它们对CTCs数量和功能的影响入手，探讨其作用机理，为新型作用机制的抗转移药物创制奠定基础。

乳腺癌是女性癌症死亡的首要原因。前期研究中，我们以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象，对金粟兰植物中倍半萜类成分的抗转移活性做了系统研究，发现数个具有一定的体内、体外抗转移作用的有效成分。机制研究显示，这些活性成分表现出不同的作用机制，而抑制CTCs的活性是其中之一。因此，本研究以循环肿瘤细胞为靶点，在金粟兰倍半萜中寻找具有CTCs抑制活性的抗转移先导物。.化学方面，我们从金粟兰科中的宽叶金粟兰、草珊瑚、丝穗金粟兰以及多穗金粟兰中总计完成了数十个倍半萜类化合物的提取分离以及收集工作。.活性筛选方面，我们采用乳腺癌细胞系体外迁移、侵袭实验对分离得到的倍半萜内酯类化合物进行筛选，确定化合物istanbulin A（ISTA）、curcolonol（CCL）以及Codonolactone（CLT）具有较强的抗转移活性。.我们的研究表明CLT具有良好的CTCs抑制活性、体内外抗转移作用以及抗血管生成作用。CLT可显著抑制乳腺癌细胞的迁移、侵袭以及结果发现化合物CLT具有良好的乳腺癌细胞粘附、迁移、侵袭能力，并可在体内抑制乳腺癌细胞的肺转移灶形成能力和CTCs释放能力。机制研究发现，CLT可显著下调Runx2的转录活性，进而抑制MMPs的活性与表达。随后的研究表明，CLT抑制CTCs释放的能力与其 EMT逆转相关。结果表明，CLT可显著抑制TGF-β1诱导的乳腺癌细胞的体内、体外的EMT作用，其机制可能是通过抑制TGF-β信号通路的活性，从而抑制Runx2的磷酸化。另外，本研究发现CLT还可通过抑制BMP诱导的信号转导通路，抑制内皮细胞的活性，从而抑制肿瘤细胞诱导的血管生成。.本研究还评价了从多穗金粟兰中分离得的ISTA和CCL的CTCs抑制活性和抗转移活性。结果发现，ISTA可显著抑制CTCs的释放并抑制乳腺癌细胞的侵袭、迁移和粘附能力。机制研究表明，ISTA可显著抑制肿瘤细胞的EMT和Runx2的磷酸化。CCL可显著抑制乳腺癌细胞的体外侵袭、迁移作用，其机制可能与MMP-9活性抑制有关。.本项目完成了几种金粟兰科植物中倍半萜类成分的系统分离与抗转移活性研究，并对其中活性较好的化合物进行了系统研究，并深入探讨了该化合物的作用机理，为金粟兰科植物的深度开发以及新型抗肿瘤转移药物的创制奠定了基础。