IL-17在小鼠原位肺移植后OB中的作用及其机制研究

Obstructive bronchiolitis (OB) is the main reason for the poor prognosis of lung transplantation. There is no effective early diagnosis and treatment is the main reasons. And alos pathogenesis is not clear. The lack of physiological animal model is an important reason for the slow progress in this area. Successfully established on the basis of the mice by orthotopic lung transplantation model, we first reported in mice transplanted lung bronchioles in line with physiological OB model. Also we found that of IL-17a is closely related to small airway fibrosis after transplantation. To confirm the role of IL-17 in the pathogenesis of OB, the project intends to further use of the OB model and use of technologies such as biology, flow cytometry etc. Through IL-17 gene knockout mice, from pathology - cell - molecular three levels to investigate the mechanism of IL-17 regulation of epithelial injury and small airway fibrosis after lung transplantation. And find a clear IL-17 source can control downstream targets to prevention and treatment of OB to improve survival rate after lung transplantation.

阻塞性细支气管炎(OB)是肺移植后预后不佳的主要原因。目前尚无有效早期诊断及治疗方法，且发病机理不清。缺乏符合生理的动物模型是该领域进展缓慢的重要原因。申报者前期在成功建立小鼠原位肺移植模型基础上，首次报道了发生于小鼠移植肺细支气管符合生理的OB模型。同时发现IL-17a与移植后小气道纤维化密切相关。为证实IL-17在OB发病机制中所起的作用，本项目拟进一步利用该OB模型，采用生物学、流式细胞等技术，通过IL-17基因敲出小鼠，从病理-细胞-分子三个层面探索肺移植后IL-17调节上皮损伤并促使小气道纤维化的机制。通过明确IL-17的来源并寻找可调控的下游靶点从而预防并治疗OB，提高肺移植后生存率。

肺移植已经作为终末期肺疾病的主要治疗手段。尽管其在过去的 30 年中取得了巨大的进步，肺移植患者生存率仍远远低于其他器官移植。闭塞性细支气管炎(OB)是肺移植后预后不佳的主要原因，目前尚无有效早期诊断及治疗方法，且发病机理不清。缺乏符合生理的动物模型是该领域进展缓慢的重要原因。. 本项目中，我们成功建立了稳定、可靠、重复性好的小鼠原位左肺移植模型，并在此基础上采用主要组织性相容性抗原匹配，次要组织相容性抗原不相容的C57BL/10-C57BL/6小鼠品系组合成功建立了肺移植后 OB 疾病模型，并以此模型作为研究对象，寻找OB 发生与移植肺内自噬活性及受体体内IL-17、IL-6及IL-10的关系。研究中采用了新型的无创气管插管方法，与有创气管插管相比，动物术后活动、摄食、体重方面恢复更快，并且存活率更高，术后重复插管成功率更高；对气道组织的病理损伤更小，术后两周内能够恢复到正常生理状态；对气管纤维化无不良影响，而传统有创插管方法在术后气管纤维增生较高。在供体操作中在主动脉根部切断获取心肺组织块，按肺动脉-肺静脉-支气管顺序分离肺门结构，采用表面无处理套管并改进打结方法，供体操作过程中采用俯卧位，单一微血管夹阻断肺门，按肺静脉-肺动脉-气管顺序完成吻合，通过这些改进缩短了学习曲线，减少手术时间，保证了技术成功率，术后同基因移植物大体及病理无明显改变，病理显示与原肺无差别。通过对小鼠肺移植后OB模型的自噬活性检测，发现自噬相关指标LC3 II比例下降，p62表达升高，表明肺移植后OB中自噬活性受抑制，通过雷帕霉素和3-MA对自噬进行干预，检测OB发生情况及IL-17、IL-10等细胞因子水平，分析自噬对OB发生的影响及可能作用机制。