非小细胞肺癌中C/EBP β对ATM/ATR和放疗敏感性的作用研究

C/EBP β is one of the key transcription factor in the gene regulatory network of lung cancer. We found the expression of C/EBP β was significantly negatively correlated with the expression of ATM and ATR in lung squamous cell carcinoma, the we detected of the expression of ATM and ATR was significantly increased in C/EBP β knockout cells. Analysis showed the existence of multiple C/EBP beta binding sites on ATM and ATR promoter, considered with the function of C/EBP β subtype in inhibition of the genes’ expression, we thought the C/EBP β might regulated the expression of ATM and ATR. For the key position of ATM, ATR in radiotherapy, we thought that C/EBP β might associat with cell radiosensitivity. We then found the decrease of radiosensitivity in C/EBP β knockout lung cancer cells, which preliminary validated our hypothesis. To further validate our hypothesis, we will first make clear the regulatory role of the different subtypes of C/EBP β on the expression of ATM and ATR, make sure their binding capacity and binding sites on ATM and ATR’s promoter. Then we will examine the influence of different subtypes of C/EBP β on cell radiosensitivity. Finally, we will detect the relationship of C/EBP β and ATM, ATR’s expression in lung cancer tissues, and its relationship with the clinical information and the effect of radiotherapy. This study will elucidate the role of C/EBP β on the regulation of ATM, ATR and the radiosensitivity, and explore the probable mechanism.

C/EBPβ是肺癌调控网络中的核心转录因子之一。我们前期发现肺鳞癌中C/EBPβ与ATM、ATR表达显著负相关，随后检测到敲除C/EBPβ导致ATM、ATR显著升高。分析发现ATM、ATR启动子上存在多个C/EBPβ结合位点，结合C/EBPβ亚型抑制表达的功能，我们认为它负调控ATM、ATR表达。考虑到ATM、ATR在放疗中的关键地位，我们认为C/EBPβ与细胞放疗敏感性有关。随后我们在肺癌细胞中初步验证了敲除C/EBPβ导致的放疗敏感性下降。我们将首先明确C/EBPβ不同亚型对ATM、ATR的调控作用，确定它与ATM、ATR的结合能力和结合位点。随后我们将检测C/EBPβ不同亚型对细胞放疗敏感性的影响。最后我们将在肺癌组织中检测C/EBPβ与ATM、ATR表达的相关性，以及它与患者临床信息等以及放疗效果的关系。本研究将基本阐明C/EBPβ 对ATM、ATR和放疗敏感性的作用并探索机制。

非小细胞肺癌是世界上发病率和死亡率最高的肿瘤。我们在预实验中发现C/EBP β与非小细胞肺癌的放疗效果有关，并预期其可能的对ATM、ATR调控作用是这一关系的原因。我们首先在A549、H1299等多种非小细胞肺癌中分别采用慢病毒敲减C/EBP β表达及上调C/EBP β不同亚型表达，成功构建稳转株，并通过qRT-PCR以及western blot等手段检测及确定了其表达变化。但接下来检测ATM和ATR表达变化以及ChIP和双荧光素酶试验进展不顺利，无法明确C/EBP β对ATM、ATR表达的调控作用，因此对这一方向进行了适当变更。我们对于以上稳转株细胞进行射线照射，发现C/EBP β对于细胞放疗效果存在一定作用。结合基因芯片的高通量结果，我们锁定了S100A7、S100A8、S100A9以及S100P等钙离子结合蛋白可能是C/EBP β的下游因子，而钙离子在细胞放疗中的重要作用已被反复提及。另外，我们发现IL6-JAK/STAT-C/EBP β之间可以形成正反馈环路，对这一环路具体细节以及其在放疗中的作用也在研究中。另外，在本项目的资助下，我们对于肺鳞癌和腺癌的鉴别因子、肺鳞癌和腺癌间的转录因子-差异miRNA-差异基因的调控网络异同点、肺腺癌胸膜侵犯对分期影响、肺癌第九组淋巴结清扫状况及对预后的影响以及早期肺癌肺内淋巴结转移的情况及影响因素等方面进行了充分的研究并取得了较好的成果，发表数十篇论文并获二份专利。