Nesfatin-1对大鼠胃黏膜胃酸和胃蛋白酶分泌的影响及机理研究

摄食是所有动物的最基本需要，是由多种来自于中枢及外周的神经元和/或细胞的信号分子来调控的复杂的行为。Nesfatin-1是一种新发现的厌食肽，存在于中枢众多与摄食调节密切相关的神经群或核团。中枢或外周给予nesfatin-1可以明显抑制大鼠的摄食量。我们的研究显示Nesfatin-1在消化系统特别是胃黏膜上皮内分泌型细胞也有较多的分布。提示该物质可能与调节胃黏膜的分泌功能相关。我们最近的研究发现侧脑室注射nesfatin-1后可明显抑制大鼠胃酸分泌和胃蛋白酶的活性。本研究中我们采取1)离体胃黏膜上皮细胞培养和组织培养来检测该物质在胃的局部作用；2)侧脑室及外周给药后连续收集胃灌流液检测其胃酸分泌量及胃蛋白酶活性，观察该物质在整体环境中对胃黏膜分泌的影响；3)初步使用几种胃酸分泌刺激因子在体给药探讨该物质影响胃黏膜分泌的可能途径。进而为将来开发该物质在肥胖治疗和胃黏膜保护方面的应用提供依据。

本课题已基本按要求完成实验内容 一）Nesfatin-1在外周分布：我们研究发现了nesfatin-1/NUCB2在人及鼠类动物消化系统的分布，主要位于胰岛、胃黏膜腺内分泌细胞及十二指肠布氏腺。 二）Nesfatin-1对大鼠胃酸分泌及胃蛋白酶活性的影响及机理研究。1）离体实验：我们进一步研究其对胃酸分泌调节的体外作用，发现：nesfatin-1（10-1 、10-2umol/L及 10-3umol/L）可明显抑制离体培养的大鼠胃粘膜细胞的基础酸分泌及三大泌酸因子（胃泌素、组胺、胆碱）刺激下的酸分泌，这种抑酸作用主要是通过下调泌酸关键酶—H+-K+-ATP 酶mRNA及蛋白表达实现的。因此提示了nesfatin-1的抑酸过程是影响了胃泌素、组胺及胆碱途径。在本实验条件下，在细胞水平未能检测出胃蛋白酶。2）在体实验：侧脑室注射nesfatin-1(5pmol/只、50pmol/只) 可抑制大鼠基础胃酸分泌，并可下调大鼠胃粘膜中H+-K+-ATP 酶的表达及活性，且这一作用在一定程度上呈剂量及时间依赖性；胃蛋白酶的活性同步受到抑制。侧脑室注射nesfatin-1可明显增加大鼠迷走神经运动背核（DMV）中c-Fos的表达，且双侧膈下迷走神经切断后，侧脑室注射nesfatin-1抑制大鼠胃酸分泌的作用明显减弱，提示中枢nesfatin-1的抑酸现象可能通过迷走神经发挥作用。同时，在侧脑室注射nesfatin-1后给大鼠腹腔注射组胺/胃泌素，中枢nesfatin-1 的抑制胃酸分泌、下调组氨酸脱羧酶（HDC）表达，及降低H+-K+-ATP 酶的表达及活性的作用减弱，提示在侧脑室注射nesfatin-1 的抑酸过程可能是影响了组胺/胃泌素通路。 外周静脉注射nesfatin-1在本实验所用剂量下对大鼠胃酸分泌、胃蛋白酶的活性均没有明显影响。 三）Nesfatin-1对胃粘膜保护作用初探：我们的研究发现，nesfatin-1可明显增加离体培养的胃粘膜上皮细胞培养液中的PGE2水平，但对EGF的含量没有影响，提示nesfatin-1可促进胃粘膜上皮细胞分泌PGE2，可能对于胃粘膜具有一定的保护作用。