胎盘细胞凋亡在HBsAg阳性孕妇PBMC母-胎转运机制中作用的研究

鉴于PBMC HBV感染在HBV宫内感染中不可忽视的作用，而胎盘细胞凋亡与PBMC母-胎转运又存在不可分割的内在联系，提示感染HBV的母亲PBMC通过胎盘进入胎儿体内导致HBV宫内感染。为验证这一假设，本研究以HBsAg阳性孕妇及其新生儿为研究对象，采用荧光定量PCR对PBMC母-胎转运定量研究；采用荧光双标记和激光共聚焦结合的方法检测感染HBV的PBMC转运；采用Tunel法检测胎盘细胞凋亡指数，采用免疫组化和半定量逆转录聚合酶链反应检测胎盘凋亡基因Caspase-3的表达，研究胎盘细胞凋亡与PBMC母-胎转运的关系。同时结合体外实验，模拟胎盘屏障研究感染HBV的PBMC转运，及胎盘细胞凋亡对转运的影响。以此综合评价胎盘细胞凋亡在PBMC母-胎转运机制中的作用，为阐明HBV宫内感染机制及提出有效防治措施提供新的理论依据，并为其它病毒宫内感染的研究提供借鉴。

乙型肝炎是我国无根治药物而以预防为主的重点传染病。而HBV宫内感染是乙肝疫苗不能阻断HBsAg阳性孕妇新生儿HBV感染的瓶颈。以往的研究显示外周血单个核细胞（PBMC）可通过胎盘屏障，而胎盘细胞凋亡与胎盘屏障通透性的增加又存在不可分割的内在联系，提示胎盘细胞凋亡有利于感染HBV的母亲PBMC通过胎盘而导致新生儿HBV宫内感染。为验证这一假设，本研究以HBsAg阳性孕妇及其新生儿为研究对象，采用荧光定量PCR研究PBMC母-胎转运；采用Tunel法检测胎盘细胞凋亡指数，采用定量逆转录聚合酶链反应检测胎盘凋亡基因Caspase-3，研究胎盘细胞凋亡与PBMC转运及新生儿HBV感染的关系。同时结合体外实验，模拟胎盘屏障研究感染HBV的PBMC转运，及胎盘细胞凋亡对转运的影响。研究结果显示：将新生儿血清HBsAg、HBV DNA和/或PBMC HBV DNA任一项阳性作为判断新生儿HBV宫内感染的标准进行宫内感染危险因素的分析，孕妇PBMC HBV DNA阳性、PBMC母-胎转运、胎盘滋养层细胞凋亡指数被引入回归方程，OR值及95%CI分别为：6.95（2.71-17.82）、5.82（1.95-17.36）和2.56（1.33-4.91），交互作用分析显示它们之间均存在交互作用（P值均＜0.05，OR95%CI不包括1）。体外模拟胎盘屏障研究胎盘细胞凋亡和感染HBV的PBMC转运的关系，结果显示胎盘凋亡率与感染HBV的PBMC的迁移率正相关，且感染HBV的PBMC转运至Transwell下室后，可感染下室的PBMC，推论若感染HBV的母亲PBMC转运至胎儿血循环会造成胎儿PBMC HBV感染。人群研究和体外实验的结果提示PBMC母-胎转运可能是HBV宫内感染的另一条感染途径。本研究结果为阐明HBV宫内感染机制及提出有效防治措施提供了新的理论依据，并为其它病毒宫内传播的研究提供思路。