基因治疗调节肌腱基因表达提高愈合强度和抑制粘连形成

本研究旨在将分子生物学前沿的基因工程技术、生长因子、微小RNA的基因沉默技术和基因治疗方法用于解决临床难题- - 增加肌腱内源性愈合强度，同时抑制粘连形成。本研究立足于已知前沿生物学知识，将外源性bFGF基因通过毒性作用小的AAV2载体导入肌腱细胞，增强腱内源bFGF基因表达，以增加肌腱愈合强度。同时采用体外基于人体miR-155基骨改装的工程化微小RNA (miRNA)，含抑制TGF-β的基因序列, 抑制肌腱TGF-β及其相关信号传递作用，以期抑制肌腱粘连形成。实验分成离体作用探索和动物实验探索部分,从分子生物学（生长因子和胶原等基质）和生物力学的变化两方面检测。预期结果：结合生长因子和miRNA基因治疗，能够促进损伤肌腱内源性愈合，减少粘连形成，增加肌腱修复后滑动功能。本研究最终旨在将此探索中有效的基因治疗技术应用到临床指屈肌腱修复。

肌腱损伤在手外科中十分常见，临床手术修复后常伴有不同程度的粘连形成，严重影响手指运动功能的回复。本研究以AAV2为载体将外源性TGFβ1 miRNA和／或bFGF导入受损肌腱中，测定它们对肌腱愈合及粘连的影响。AAV2是我们小组前几年经大量实验证实对肌腱组织毒性小、反应轻、转染效率高的一种基因治疗病毒载体，故本研究仍然采用这一高效的转染工具。TGFβ1经证明在肌腱损伤愈合过程中疤痕粘连形成中起重要作用，故我们通过体内外转染TGF β1 miRNA抑制TGFβ1的表达，以观察肌腱愈合的变化，我们的结果表明TGFβ1 miRNA在抑制粘连形成、提高肌腱滑行功能的同时也会导致肌腱愈合强度不同程度地下降。因此，在本研究的后半部分我们同时转染TGFβ1 miRNA和bFGF至损伤肌腱，bFGF在我们先期的研究中被证实能显著提高肌腱愈合强度，同时不会导致粘连增加，我们希望bFGF的加入能够弥补TGFβ1 miRNA带来的缺憾。结果表明体内同时转染TGFβ1 miRNA和bFGF，肌腱滑行功能提高，粘连形成减少，而且在肌腱愈合的重塑期（4-8周），愈合强度显著升高。这些结果基本达到了我们的预期，我们希望通过这种深入的探索能将基因治疗技术在肌腱愈合研究领域进一步拓展，为将来的临床应用提供充实的实验依据。