新耐药基因Txr1在进展期胃癌奥沙利铂化疗中的耐药机制研究

胃癌发病隐匿，恶性度高，其发病率、死亡率位居我国恶性肿瘤前三位，多数患者发现即已达到进展期，并且以手术为主的综合治疗效果未得到根本改善。近年来胃癌术后化疗越来越受到人们重视，奥沙利铂化疗逐渐成为胃癌术后化疗的主流方案；但其多药耐药是化疗急需解决的问题，现有的耐药机制学说尚不能很好解释。我们前期发现新耐药基因Txr1与进展期胃癌关系密切，可能在胃癌化疗耐药中起到重要作用。我们拟在组织水平上，研究Txr1的表达与胃癌患者预后以及化疗耐药的关系；继而研究奥沙利铂干预对胃癌细胞耐药性的影响以及Txr1的表达改变；通过外源性表达以及基因沉默研究Txr1与胃癌细胞奥沙利铂耐药的关系；将TXR1耐药途径抑制，观察对奥沙利铂耐药的影响；从而探讨Txr1作为逆转奥沙利铂耐药性靶点的可行性。通过此项课题研究，为掌握奥沙利铂耐药机制建立良好的基础；有利于提高奥沙利铂化疗效果、改善胃癌预后。

近年来胃癌术后化疗越来越受到人们重视，奥沙利铂化疗逐渐成为胃癌术后化疗的主流方案；但其多药耐药是急需解决的问题，现有的耐药机制学说尚不能很好解释。我们前期发现新耐药基因Txr1与进展期胃癌关系密切，可能在化疗耐药中起到重要作用。收集病理确诊的Ⅱ、Ⅲ期并经根治性手术和规范化疗的胃癌患者临床资料及标本石蜡块，制作组织芯片，行免疫组化，检测Txr1，TSP1，Survivin等表达。.以逐步递增法，建立胃癌奥沙利铂耐药细胞系SGC7901/L-OHP。研究SGC7901/L-OHP与亲本细胞在细胞形态，Txr1表达定位，以及奥沙利铂干预对细胞周期，凋亡和其他耐药相关因子的影响。利用RNA干扰技术沉默Txr1基因，检测对SGC7901/L-OHP细胞耐药性，细胞周期，凋亡以及其他耐药相关因子表达的影响。.结果： 3年无病生存组胃癌病例的Txr1，Survivin表达阳性率明显低于复发转移组；与淋巴结转移，分化程度，浸润深度，肿瘤分型无明显相关性。SGC7901/L-OHP的耐药指数RI为3.59。而与亲本细胞相比，倍增时间及细胞周期无明显差异，而形态发生变化，Txr1表达部位由胞核向胞浆转移，同时耐药细胞中Txr1、MDR1及Survivin 的表达均高于亲本细胞，而TSP1的表达低于亲本细胞。以奥沙利铂干预SGC7901/L-OHP细胞，发现Txr1的表达量随药物作用时间的延长以及药物浓度的增加而增高；Survivin表达量也有随之增高的趋势，且与Txr1相关。而TSP1表达下降，与Txr1 呈反向； SGC7901/L-OHP细胞的Txr1基因敲除后, 对奥沙利铂的耐药性明显降低，细胞周期阻止在S期；凋亡率明显升高，而TSP1表达升高。.结论：Txr1的表达与胃癌患者3年无病生存率有关，可能与铂类化疗耐药有关；SGC7901/L-OHP耐药与 Txr1 ，Survivin，MDR1的高表达均有关；Txr1 的表达与TSP1的表达呈反向相关，可能是Txr1对奥沙利铂耐药的机制之一；Txr1 的表达与Survivin的表达相关，在促进凋亡的通路中可能有着协同作用；基因沉默 Txr1 可增加SGC7901/L-OHP对奥沙利铂的敏感性；Txr1可作为逆转奥沙利铂耐药性的新靶点。通过此项课题研究，为掌握奥沙利铂耐药机制建立良好的基础；有利于提高奥沙利铂化疗效果、改善胃癌预后。