补肾助阳中药与合并脑外伤骨折加速愈合分子机制的研究

在临床中观察到①骨折合并脑外伤骨痂过度生长，肌肉中出现异位骨化，骨折愈合明显加快；②补肾阳中药右归饮可促进骨折愈合，机制不清。根据中医心脑理论及血清素(5-HTT)和骨形态发生蛋白BMP-2水平与脑、骨、小肠的关系，采用免疫组化和条件性基因敲除和转基因技术，阐明合并脑外伤骨折愈合分子机制及补肾中药效应环节。本研究①分别观察右归饮含药血清与中度脑外伤血清对体外培养成骨细胞的增殖能力、成骨细胞矿化结节形成的影响；②建立脑损伤和骨折动物模型，分为正常对照组、脑损伤组、骨折组、脑损伤+骨折组、右归饮+骨折组，术后不同时间测定血清中5-HTT等生长因子含量，并取骨痂和十二指肠进行免疫组化及图像分析，测定不同生长因子在靶组织中的表达差别，确定关键生长因子；③细胞特异性转基因技术证实其与BMP-2 在骨折愈合中的协同作用。在基因水平阐释其作用机制，明确中医脏腑心（脑）-小肠-骨生理联系机制的物质基础。

在临床中观察到①骨折合并脑外伤骨痂过度生长，肌肉中出现异位骨化，骨折愈合明显加快；②补肾阳中药右归饮可促进骨折愈合，机制不清。③心（脑）-小肠-骨具体生理联系机制尚不明确；本研究从细胞、基因和分子水平来探索补肾助阳中药右归饮与合并脑外伤促进骨折愈合的机制。结果发现①右归饮含药血清和中度脑外伤血清均能促进成骨细胞的生长②基因芯片结果提示, 模型组与正常对照组相比,骨痂及十二指肠中PDGF、CGRP、VEGF、bFGF基因表达明显上升（R>2）,有统计学意义。③ELISA提示各实验组血清在术后3d，1，2，3，4，bFGF、CGRP、VEGF浓度均高于空白对照组（P<0.05）,各实验组在术后3d，1，2，3，4，PDGF的血清浓度均较对照组降低（P<0.05），在术后第5周时各模型组与空白对照组比较浓度无明显差异（P>0.05）。④PCR 、Western Blot及免疫组化染色结果显示骨痂与十二指肠中各指标表达趋势一致；骨折合并脑外伤及骨折合并右归饮组骨痂及十二指肠中PDGF、CGRP、VEGF、bFGF表达较单纯骨折组和单纯脑损伤组表达量明显增加（p<0.05），峰值时间明显提前(p<0.05),且峰值维持时间久；骨折合并脑外伤与骨折合并大剂量右归饮各指标比较差异无统计学意义（p>0.05）,大、中、小剂量间比较差异有统计学意义(p<0.05)。研究表明1.PDGF、bFGF、CGRP、VEGF是骨折合并右归饮及骨折合并颅脑损伤后加速骨痂形成的生长因子。2.骨折愈合过程中早期起主要作用的生长因子为PDGF、bFGF、CGRP、VEGF，中期主要为PDGF、CGRP、VEGF，晚期则主要为VEGF。3. 心（脑）-小肠-骨三者通过PDGF、bFGF、CGRP、VEGF联系在一起。4.大剂量为右归饮治疗的最佳剂量。