CircRNA_0080744-miR-149-TLR4调控通路在肝移植术后早期移植物功能不全中的作用及机制研究

Early allograft dysfunction (EAD) after liver transplantation (LT) is a risk factor affecting graft survival and recipients prognosis.Ischemia/reperfusion injury (IRI) is considered to be the main cause of EAD. Toll-like receptor 4 (TLR4) is closely related with IRI. We have found that circRNA_0080744 and TLR4 expression was increased in EAD recipients. But the mechanism is unclear. We hypothesized that circRNA_0080744 promote the occurrence of EAD by acting as the sponge of miR-149 through TLR4. To verify this hypothesis, the applicants plan to use TLR4 as the target gene and test the expression and regulation of circRNA_0080744, miR-149 and TLR4 using circR-IP, luciferase report gene and other related methods. Furthermore, respective antagonization of circRNA, miRNA and TLR4 expression would be carried out to explore their potential down stream mechanisms. The anticipated results may provide new clues for the pathogenesis and therapy of EAD and the reasonable choice of the donor liver.

肝移植术后早期移植物功能不全(EAD)是影响移植物存活与受者预后的危险因素，供肝缺血再灌注损伤（IRI）是导致EAD的主要原因，Toll样受体4 (TLR4)参与缺血再灌注损伤。我们前期研究发现circRNA_0080744和TLR4在EAD供肝组织中表达升高，但具体机制未明。结合前期研究，我们推测circRNA_0080744竞争性结合miR-149，调控TLR4参与肝移植术后EAD的发生。本课题计划以TLR4为靶基因，运用circR-IP、荧光素酶报告基因等技术探索供肝circRNA_0080744、miR-149和TLR4在EAD 中的表达及相互调控情况，再分别对其进行过表达或拮抗，以阐明可能的下游机制，为EAD发病机制研究和供肝的合理选择提供新思路。

肝移植术后早期移植物功能不全(EAD)是影响移植物存活与受者预后的危险因素，EAD发病机制及诊治研究，在整个肝移植术后并发症研究中占据重要地位。我们基于规范化管理EAD标本及信息资料库和多中心大样本数据，揭示了移植物重量、冷缺血时间、供肝年龄、MELD评分是EAD发生临床独立危险因素，并基于上述数据建立EAD发生预测模型，有效预警EAD发生；开展基于供肝分子特征EAD预警研究，明确与EAD发生相关的两个环状RNA分子 circFOXN2和circNECTIN3，进一步采用RNAhybrid和TargetScan预测circFOXN2和circNECTIN3的靶向miRNA, 发现miR-135b-5p和miR-149-5p是circFOXN2和circNECTIN3潜在靶点，为后续开展进一步研究奠定基础。对EAD发生相关下游蛋白进行筛选，单因素分析发现供肝HO-1、TNF-a和TLR4在非EAD组织中表达较高。进一步采用多因素分析，发现HO-1和TNF-a是EAD发生的独立危险因素，其中供肝组织HO-1表达与受者预后密切相关。开展ABO血型不相容肝移植效果及安全性研究，发现符合杭州标准肝癌受者接受ABO血型不相容肝移植，EAD等并发症无显著增加，预后优于超越杭州标准者。以上一系列研究结果，可为EAD发病机制研究和供肝的合理选择提供新思路。此外，本项目与剑桥大学联合发表EAD领域学术论文1篇，与剑桥大学联合举办器官移植前沿联合学术研讨会两次，团队成员多次参加国家肝移植协会年会和中国器官移植大会，并作口头报告或壁报交流。本项目资助下，共发表SCI收录论文7篇（其中original article 4篇），中文核心期刊论文2篇。协助培养博士研究生3名(2人已毕业，1人在读)、硕士研究生2名（均在读）。本项目相关成果作为重要内容，荣获2021年浙江省科技进步一等奖(项目负责人排名第10)、2020年中华医学科技奖医学科学技术二等奖(项目负责人排名第5)。