石斑鱼特异性CpG ODN的筛选及其作为SGIV疫苗佐剂的研究

石斑鱼是重要的海水经济养殖鱼类，然而在高密度集约化养殖条件下各种病害频繁爆发成为其可持续健康发展的主要瓶颈。因此，疫苗和新型免疫佐剂的研发显得尤为重要。CpG ODN能诱导强有力的天然保护性免疫和Th1型免疫，是研发的热点。我们前期已制备了有效的石斑鱼虹彩病毒SGIV灭活疫苗，并从SGIV全基因组序列中鉴定到了3个能诱导机体产生明显保护作用的抗原基因。在此基础上，设计、合成和筛选出对石斑鱼有强刺激效果的CpG ODN，初步了解其在鱼类和高等脊椎动物中的作用差异；分析筛选到的CpG ODN对石斑鱼天然免疫相关细胞和分子的影响，从而加深对鱼体应答CpG ODN的认识，为其用作石斑鱼的免疫增强剂和石斑鱼病原疫苗的佐剂奠定理论基础。同时将其作为SGIV灭活疫苗和DNA疫苗的佐剂，分析评价其免疫增强效果，以期为CpG ODN在SGIV疫苗上的应用以及研制新型复合佐剂疫苗、DNA疫苗提供依据。

石斑鱼是重要的海水经济养殖鱼类，各种病害特别是病毒病的频繁爆发已成为其健康可持续发展的主要瓶颈。因此，疫苗和新型免疫增强剂的研发显得尤为重要。CpG ODN 能诱导强有力的天然保护性免疫和Th1 型免疫，CpG ODN作为疫苗佐剂能增强体液和细胞免疫应答。本项目在前期工作的基础上，合成和筛选出对石斑鱼有强刺激效果的CpG ODN，分析筛选到的CpG ODN 对石斑鱼天然免疫相关细胞和分子的影响。同时将其作为SGIV 灭活疫苗的佐剂，分析评价其免疫增强效果。取得的结果简述如下：1）建立了石斑鱼特异性CpG ODN的筛选方法和条件。MTT法测定CpG ODN对石斑鱼鱼头肾淋巴细胞增殖作用，荧光素酶报告基因实验分析CpG对石斑鱼头肾淋巴细胞的IFN诱导。2）分析了合成的26条CpG ODN 对石斑鱼天然免疫相关细胞和分子的影响，筛选到了2条对石斑鱼有较强刺激作用的CpG ODN。3）CpG ODN能显著增强石斑鱼虹彩病毒灭活疫苗的效果，提高特异性抗体滴度，降低灭活疫苗使用量。本研究将为石斑鱼的免疫增强剂和石斑鱼病原疫苗的佐剂开发提供依据，具有重要的理论意义和应用价值。.本项目按照项目计划书开展，具体实验方案在研究过程中根据实际情况进行了进一步设计。