血清生物标记物Cx对重症肌无力的诊断价值及其靶向治疗的作用研究

重症肌无力（MG）是乙酰胆碱受体（AChR）抗体介导的以神经肌肉接头受损为特征的自身免疫性疾病，早期易误诊漏诊，疗效不确切。寻找MG患者血清生物标记物将为该病的早期诊断和靶向治疗开辟新途径。我们前期研究表明：通过Seldi技术发现MG血清中存在多个差异表达蛋白，优化的决策树模型对MG诊断具有高敏感性和高特异性。利用MS-TOF/TOF技术鉴定出了补体成分相关蛋白Cx。本项目将进一步采用Western-blot等方法验证该蛋白、ELISA法测定大样本MG血清标本的Cx含量，为MG诊断寻找新的标记物；探讨Cx对MG的致病作用；利用杂交瘤技术制备Cx单抗，在C2C12细胞水平探讨Cx单抗能否减弱MG血清的细胞毒性及对细胞AChR表达、群集数量、形态等的影响，在动物水平研究Cx单抗对EAMG建模的影响和治疗作用及其对IgG亚群、细胞因子水平、神经肌肉接头等的影响，为MG治疗寻找新靶点。

重症肌无力（MG）是乙酰胆碱受体（AChR）抗体介导的以神经肌肉接头受损为特征的自身免疫性疾病，早期易误诊漏诊，疗效不确切。寻找MG患者血清生物标记物将为该病的早期诊断和靶向治疗开辟新途径。我们通过Seldi技术发现MG血清中存在多个差异表达蛋白，优化的决策树模型对MG诊断具有高敏感性和高特异性。利用MS-TOF/TOF技术鉴定出了补体成分相关蛋白C1q。我们进一步采用Western-blot、ELISA等方法验证并定量该蛋白；然而，实验结果一直波动较大，最终未能验证出C1q在重症肌无力中的差异表达。经过反复探索条件及科研友人的协助分析，其原因可能源于蛋白质谱的不稳定性及血清蛋白的个体差异性。课题组一直致力于神经肌肉疾病的研究，我们与美国俄亥俄州立大学研究所在肌肉萎缩症（Muscular Dystrophy，MD）的研究发现了蛋白MG29在MD肌肉组织中表达明显下降并与肌纤维的破坏程度成正比；MG29蛋白为一种新的细胞膜蛋白分子，其在神经肌肉疾病的免疫损伤和修复中发挥重要作用。我们进一步研究发现MG29在MG患者的骨骼肌组织中也表达缺失或下调。利用Western-blot、Immunohistochemistry等方法，我们发现，相对于正常对照组，MG29在MG患者肌肉组织中的表达明显下调；该差异表达与患者的MG疾病严重程度相关（详见报告正文）。另外，我们还通过免疫荧光定位技术，明确MG29主要定位于细胞膜，推测MG的发生和发展可能与MG29的表达及亚细胞定位相关，该部分正在研究之中。我们研究还发现MG29与microRNA181a的表达相关，在MG肌肉组织和患者血清中，microRNA181a表达明显升高。MG29蛋白及microRNA181a在MG及其不同亚型中差异性表达，使其有望成为MG诊断和治疗的新靶点。另外，重症肌无力临床治疗疗效及手术疗效的分析是本课题的重要组成部分，目前我们已经在重症肌无力亚群体¬¬——眼肌型重症肌无力、青少年型重症肌无力亚群中完成胸腺切除术治疗重症肌无力临床疗效的评估，其研究成果已经相继发表于Annals of Thoracic Surgery（2011，2013）；另外，我们已经完成胸腺切除术在重症肌无力危象人群治疗中的长期疗效分析，其相关成果已经投稿World Journal of Surgery。