14-3-3γ在子宫肌瘤发生发展中的作用和信号传导研究

子宫肌瘤是导致生育年龄妇女子宫切除的首位原因，严重威胁了女性健康，但其发生发展的分子机制未明。研究表明：14-3-3基因甲基化致其蛋白表达降低与肿瘤的发生密切相关。我们的前期工作中，采用双向电泳和质谱技术发现子宫肌瘤中14-3-3γ的表达明显低于正常肌层。同时，我们的预实验发现抑制14-3-3γ蛋白表达与子宫肌层细胞的增殖相关，但其在子宫肌瘤中的作用尚缺乏依据。为此，本研究拟应用甲基化特异性PCR和Western blot等技术，研究子宫肌瘤中14-3-3γ的表达与雌孕激素、基因甲基化的相关性。同时，通过流式细胞仪、质粒转染、RNA干扰、免疫共沉淀等技术，探讨14-3-3γ对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响；明确子宫肌瘤主要的信号传导通路MAPK和PI3K/Akt中与14-3-3γ相互作用的靶蛋白，阐明14-3-3γ在子宫肌瘤发生发展中的作用和信号传导，为子宫肌瘤的治疗提供新思路和实验依据。

子宫肌瘤在生育年龄妇女中高发，严重影响了女性健康，但其发生发展的分子机制未明。在我们的前期工作中，采用蛋白质组学方法，发现子宫肌瘤中14-3-3γ的表达明显低于周围正常的子宫肌层组织。本研究进一步研究不同月经周期子宫肌瘤中14-3-3γ蛋白的表达情况及其与雌孕激素受体、子宫肌瘤临床病理参数以及启动子甲基化之间的关系。同时，分别构建重组质粒14-3-3γ-pCMV-N-Flag和腺病毒载体pHBAd-MCMV-RFP-14-3-3γ，测序鉴定后，转染原代培养子宫肌瘤细胞，研究其对子宫肌瘤的增殖和凋亡等的作用及作用相关的机制和蛋白。.结果发现：（1）子宫肌瘤中14-3-3γ的表达不随月经周期、子宫肌瘤大小、类型和位置而改变。（2）子宫肌瘤中14-3-3γ的表达明显低于子宫肌层，尤其是在增殖和分泌期、年龄小于48岁、肌瘤大小4-8cm、多发性和肌壁间肌瘤中。（3）子宫肌瘤中14-3-3γ蛋白表达与ERα呈负相关性。（4）子宫肌瘤中14-3-3γ的甲基化高于子宫肌层，尤其是在增殖和分泌期，甲基化与14-3-3γ蛋白的低表达相关。（5）构建的重组14-3-3γ载体经鉴定构建正确，子宫肌瘤细胞转染重组体后的14-3-3γ表达明显高于转染前（P＜0.05）。（6）子宫肌瘤细胞转染重组体后，细胞增殖受到抑制，但凋亡率明显增高（P均＜0.05）。（7）14-3-3γ对子宫肌瘤细胞抑制增殖和促进凋亡的作用与p-Vimentin蛋白、AKT-Foxo通路和MEK1/2-ERK1/2通路相关（P＜0.05），而与TSC2、mTOR、TGFBI和Desmin无明显相关性。.本研究结果提示14-3-3γ在生育年龄的妇女中，尤其是大的子宫肌瘤、多发性和肌壁间子宫肌瘤中起了重要的作用。通过成功构建14-3-3γ基因高表达的载体，14-3-3γ可抑制子宫肌瘤细胞的增殖和促进细胞凋亡，该作用与p-Vimentin蛋白、AKT-Foxo通路和MEK1/2-ERK1/2通路相关。为后续将14-3-3γ应用于子宫肌瘤治疗提供了依据和思路。