MicroRNA在角膜上皮损伤修复中的表达谱及功能研究

角膜上皮细胞的增殖和迁移在角膜损伤修复中起着至关重要的作用，其分子机制尚不清楚。microRNA (miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的非编码小分子RNA。本课题拟建立角膜损伤修复的小鼠模型，通过芯片分析正常角膜与修复后角膜上皮的miRNAs表达谱，深入研究差异表达的miRNAs对角膜上皮细胞增殖和迁移的影响。在此基础上，通过生物信息学方法和分子生物学技术寻找候选miRNAs的靶基因以及调控的细胞内信号传导通路，并通过角膜上皮损伤动物模型在体内研究特定miRNAs 的功能。从而明确miRNAs在角膜上皮损伤修复过程中的表达谱以及生物学功能。为角膜损伤相关疾病的临床防治提供新的思路及理论依据。

角膜上皮细胞的增殖和迁移在角膜损伤修复中起着至关重要的作用，其分子机制尚不清楚。MicroRNA (miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的非编码小分子RNA，在细胞的增殖、迁移、以及多种生理和病理过程中起到重要的调控作用。.本项目首先建立了小鼠角膜上皮损伤修复模型，通过NanoString nCounter技术系统分析了小鼠角膜上皮损伤修复过程中的miRNA表达谱，总共鉴定出15个显著下调的miRNA分子，以及14个显著上调的miRNA分子，其中miR-204和miR-184是变化最为显著的miRNA。进一步通过Targetscan预测了这些miRNA的靶基因并构建了miRNA-靶基因网络，通过GO分析等生物信息学方法分析了特异性靶基因的生物学功能以及介导的重要信号通路。功能实验揭示了miR-204，miR-184和miR-200b/c可以抑制人角膜上皮细胞的增殖和细胞周期，并可抑制细胞的迁移。进一步的分子机制研究揭示了miR-204作用于靶基因SIRT1而抑制人角膜上皮细胞的增殖和迁移，miR-184可作用于靶基因cdc25A和SRC而抑制细胞的增殖和迁移，miR-200b/c可作用于靶基因cyclinE2以及ZEB1/2而抑制细胞的增殖和迁移。通过角膜损伤小鼠模型的在体研究证明了下调miR-204和miR-184的表达可促进角膜的修复。总之，本项目的研究阐明了miRNA在角膜损伤修复过程中的表达谱，生物学功能与分子机制，为角膜损伤相关疾病的临床治疗提供了新的靶点。