NF-kB/miRNA/靶基因分子网络调控卵巢癌发生发展的分子机制研究

This study intends to revealing the regulatory mechanism among miRNAs, NF-κB signal pathway and target genes network on the Ovarian cancer(OC). Our previous miRNA microarray data to screen the miRNAs that are possibly regulated by the nuclear factor-kappa B1 (NF-κB1)in human OC cell line ES-2, miR-19a-5p and miR-194-1 were selected as research subjects. our study will using Dual Luciferase Reporter Gene Assay、EMSA and other techniques to confirm the relationship between miRNA and NF-κB, and establish a miRNAs overexpressed/inhibit expression of OC cell lines and corresponding animal model to verify the effection of miRNAs and target genesthe on OC cell proliferation, invasion, angiogenesis, apoptosis and tumor.Then using Western Blot, confocal laser scanning technology and quantitative PCR to detect the expression of key protein in NF-κB signaling pathways.

MiRNA作为一种重要的调控子，可通过调节NF-κB信号通路的关键蛋白影响卵巢癌的发生与发展，但miRNA、靶基因与NF-κB三者之间的网络调控在卵巢癌发病机制中的作用，尚未明确。本课题前期通过芯片筛选在卵巢癌细胞中受NF-κB调控的miNRA，确定miR-19a-5p和miR-194-1为研究对象。为了进一步阐明miRNA、NF-κB和靶基因之间的网络调控图，拟通过双荧光素酶报告系统、EMSA等技术检测NF-κB与miRNA之间的相互调控作用；建立 miRNAs 过表达/抑制表达卵巢癌细胞系和相应的动物模型，验证 miRNAs 与靶基因对卵巢癌细胞增殖、侵袭、凋亡及成瘤的作用，并利用 Western Blot、激光共聚焦技术、定量PCR检测其对NF-κB信号通路关键蛋白的表达，揭示 miRNAs//NF-κB /靶基因分子网络调控对卵巢癌发生发展的分子机制。

MiRNA作为一种重要的调控子，可影响卵巢癌的发生与发展。本课题前期通过芯片筛选在卵巢癌细胞中受NF-κB调控的miNRA，确定miR-19a-3p和miR-194-5p为研究对象。通过本项目的实验研究，获得了以下结果：（1）miR-19a-3p和miR-194-5p分别在在卵巢癌组织及细胞中高表达或低表达；（2）构建高表达或抑制miR-19a-3p和miR-194-5p表达的慢病毒载体并感染卵巢癌细胞系ES-2和SKOV3，CCK-8、集落克隆形成、transwell迁移与侵袭实验检测，miR-19a-5p和miR-194-1分别在体外具有促进或抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭的能力；（3）建立稳定高表达或抑制miR-19a-3p和miR-194-5p表达的SKOV3细胞系，通过裸鼠成瘤实验证实miR-19a-3p和miR-194-5p在体内分别促进或抑制肿瘤的生长；（4）生物信息学分析、双荧光素酶报告基因实验及免疫印迹证实胰岛素样生长因子结合蛋白-3 (IGFBP-3)与胰岛素生长因子1受体(IGF1R)、PPFIA结合蛋白1（PPFIBP1）分别为miR-19a-3p和miR-194-5p的直接靶基因，并受到其miRNA的负性调控；（5）在ES-2和SKOV3细胞中过表达或抑制IGFBP-3与IGF1R、PPFIBP1的表达后，IGFBP-3与IGF1R、PPFIBP1分别抑制或促进进卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭的恶性进程；（6）染色质免疫沉淀反应和电泳迁移率检测分析表明NF-κB可直接结合miR-19a-5p和miR-194-1的启动子区，并调控miR-19a-3p和miR-194-5p在卵巢癌细胞的表达。由此在卵巢癌中形成了NF-κB/miRNAs/靶基因的调控轴，这扩展了我们对卵巢癌发病机制的理解，也为卵巢癌新的诊断和治疗方法提供理论基础和实验依据。