AOPPs对巨噬细胞胆固醇流出的影响及机制研究

晚期氧化蛋白产物(AOPPs)是一种新的动脉粥样硬化(As)独立危险因素，以往对其致As的机制研究主要集中在氧化应激与炎症方面，而与脂质代谢的相关研究甚少。As的关键病理事件是细胞内胆固醇蓄积导致泡沫细胞形成，而调控三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1介导的胆固醇流出可影响泡沫细胞的形成。本项目则从ABCA1和ABCG1介导的细胞胆固醇流出来探讨AOPPs的在As发病中的可能作用及机制，拟进行以下研究：①采用THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型，观察AOPPs对细胞内胆固醇含量及胆固醇流出和ABCA1、ABCG1表达的影响；②采用激动剂、阻断剂或siRNA等干预手段，探讨JAK/STAT→LXRα信号途径在AOPPs影响胆固醇流出中的作用。本项目的实施将有助于揭示AOPPs与脂质代谢的关系及其在As发病中的作用及机制，为探讨As的发病机制及防治提供新的实验依据。

研究提示，晚期氧化蛋白产物（AOPPs）可能在动脉粥样硬化（As）发生发展中起重要作用，但其致As的分子机制尚不清楚。As的关键病理事件是细胞内胆固醇蓄积导致泡沫细胞形成，而调控三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1介导的胆固醇流出可影响泡沫细胞的形成。因此，本项目通过对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞及As易感的apoE基因敲除（apoE-KO）小鼠的研究，观察AOPPs对细胞胆固醇流出及胆固醇含量的影响，并通过相应的干预手段，探讨LXRα、JAK/STAT信号途径及ABCA1等相关分子在AOPPs影响细胞胆固醇流出中的作用，以期进一步阐明其作用机制。在研究中我们首先发现，AOPPs呈时间和浓度依赖性抑制THP-1巨噬细胞胆固醇的流出，增加细胞内胆固醇的蓄积，并且抑制细胞ABCA1的表达。其次，我们采用激动剂、抑制剂及siRNA的方法干预相关蛋白，结果发现，LXRα激动剂22(R)-Hch可抑制AOPPs的作用，而抑制LXRα的表达，AOPPs的作用增强；同时发现，AOPPs可促进THP-1巨噬细胞STAT1酪氨酸磷酸化，采用siRNA抑制STAT1的表达，AOPPs的作用效果减弱，而JAK抑制剂也可以减弱AOPPs的作用。这些结果表明，AOPPs可通过调控LXRα和JAK/STAT 信号途径影响THP-1巨噬细胞ABCA1等关键分子的表达和胆固醇流出。最后，我们复制了As动物模型，证实AOPPs可增高apoE-KO小鼠的血脂水平，促进其As病变形成和肝脏脂质蓄积，下调主动脉、肝脏和小肠ABCA1、ABCG1及LXRα的表达，而AG-490可部分拮抗AOPPs的作用。此外，我们还发现，AOPPs下调小鼠腹腔巨噬细胞的ABCA1、ABCG1和LXRα的表达，减少其细胞内胆固醇的流出，而AG490或JAK siRNA可部分抑制AOPPs的作用。综上所述，本研究显示AOPPs可促进apoE-KO小鼠脂质蓄积和As病变的发展，减少巨噬细胞胆固醇流出，下调ABCA1和ABCG1的表达，其机制主要是通过调节LXRα和JAK/STAT信号通路来实现的。本项目的研究为揭示As的发病机制及探讨以ABCA1为靶点的As防治研究提供新的实验依据。