基于VEGFR2信号通路研究山奈酚治疗慢性肠炎的分子机制

Chronic enteritis is a common disease in animal husbandry, which seriously affects the economic benefits and the development of animal husbandry. Angiogenesis plays an important role in the development of chronic enteritis. In this study, dextran sulfate (DSS)- induced mice will be used as chronic enteritis models. The anti-inflammatory and antiangiogenic effects of kaempferol will be demonstrated by observing the inflammation and vascular proliferation in mice. The LPS + TNF-alpha-induced primary intestinal microvascular endothelial cells will be used as the cell model. The antiangiogenic effects of kaempferol will be explored at the cellular level by detecting cell proliferation, permeability, migration, endothelial tube formation and secretion of vascular endothelial growth factor. On this basis, key proteins of the VEGFR2 pathway (ERK, p38 MAPK, Akt) and their phosphorylation levels were detected in endothelial cells to explore the molecular mechanism of kaempferol inhibiting angiogenesis. Then the mechanism will be verified by using protein inhibitors. This study will reveal the mechanism of kaempferol in the treatment of chronic enteritis from the perspective of angiogenesis, and provide a new perspective and idea for the research on the anti-inflammatory effect of traditional Chinese veterinary medicine.

慢性肠炎是畜牧业中常见的疾病，严重影响着经济效益和畜牧业的发展。血管生成在慢性肠炎发展中起着重要的作用。本课题用硫酸葡聚糖（DSS）诱导小鼠慢性肠炎模型，通过观察小鼠的肠炎程度和血管增生程度证明山奈酚对慢性肠炎和血管生成的抑制作用。在细胞试验中，以LPS+TNF-α诱导的原代肠微血管内皮细胞作为模型，通过检测细胞增殖、通透性、迁移、成管作用及血管内皮生长因子分泌，从细胞层面探究山奈酚抑制血管生成的作用。在此基础上，检测内皮细胞VEGFR2通路关键蛋白（ERK、p38 MAPK、Akt）及其磷酸化的水平，探究山奈酚抑制血管生成的分子机制，并利用蛋白抑制剂加以验证。本研究将从血管生成的角度揭示山奈酚治疗慢性肠炎的作用机制，为中兽药抗炎研究提供新的角度和思路。

慢性肠炎是畜牧业中常见的疾病，严重影响着经济效益和畜牧业的发展。血管生成在慢性肠炎发生发展中起着重要的作用。本课题用硫酸葡聚糖（DSS）诱导小鼠慢性肠炎模型，通过观察小鼠的肠炎程度、炎性因子分泌、炎性细胞浸润、血管通透性、上皮屏障通透性、血管生成标志物等证明山奈酚对慢性肠炎和血管生成的抑制作用。在细胞试验中，以LPS+TNF-α诱导的原代肠微血管内皮细胞作为模型，通过检测细胞增殖、通透性、迁移、成管作用及血管内皮生长因子分泌，从细胞层面探究山奈酚抑制血管生成的作用。在此基础上，检测内皮细胞VEGFR2通路关键蛋白（ERK、p38 MAPK、Akt）及其磷酸化的水平，探究山奈酚抑制血管生成的分子机制，并利用蛋白抑制剂加以验证。研究表明，山奈酚有效抑制炎性条件下血管内皮细胞的迁移和成管，抑制炎性因子诱导的内皮屏障高渗透。山奈酚的保护作用是通过VEGFR2/Akt/p38信号通路实现的。本研究将从血管生成的角度揭示山奈酚治疗慢性肠炎的作用机制，为中兽药抗炎研究提供新的角度和思路。.此外，我们建立了一株原代肠内皮细胞细胞系，并用原代肠内皮细胞与上皮细胞构建肠内皮-上皮共培养模型，以此证明肠内皮细胞对肠上皮屏障的调控作用，结果表明，内皮细胞对上皮屏障具有双向调节作用，即在正常条件下，内皮细胞促进上皮屏障的完整性，而当模型处于炎性条件下，内皮细胞会通过分泌炎性因子加速上皮屏障的破坏。山奈酚通过抑制NF-κB信号通路调节紧密连接蛋白，抑制LPS诱导的共培养模型损伤。.在DSS诱导的肠炎之外，我们用高脂饮食诱导小鼠代谢性肠炎，并研究山奈酚的调节作用。结果表明，肥胖、代谢炎症、血脂升高等代谢紊乱都可以通过补充山奈酚来缓解。此外，在HFD诱导的小鼠中，还发现肠通透性增加、肠道固有层免疫细胞（巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞）浸润和炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1）过度表达。补充山奈酚通过减少TLR4/NF-κB通路的激活，改善了肠道屏障的完整性并抑制了肠道炎症。此外，通过测序对盲肠微生物群的表征表明，补充山奈酚能够抵消与肥胖相关的生物失调。我们的研究揭示了山奈酚抗肥胖作用的多重作用机制，并为山奈酚作为肥胖治疗的膳食补充剂的开发提供了科学证据。