干扰素调节因子-4结合蛋白（IBP）调节Th17细胞参与排斥反应的机制研究

器官移植急性排斥反应是影响移植成功和移植物长期存活的关键问题之一。本课题组的前期研究工作已证实Th17细胞参与了排斥反应的发生与发展，但是对于排斥反应中，Th17细胞如何生成、调节以及发挥作用，机制不明。IRF-4被认为是Th17细胞分化的重要调节因子，其作用受IBP的调控。本研究通过体外及体内试验观察排斥反应过程中抗原提呈细胞的活化及各种细胞因子对CD4+T细胞IBP、IRF-4表达的影响，检测IL-21、RORγ转录水平，及各种细胞因子生成的调节，观察该通路对Th17所介导的排斥反应的调节机制；并通过ShRNA阻断IBP、IRF-4、及IL-21的表达，观察对Th17生成及排斥反应发生的影响。期望阐明Th17参与排斥反应的机制，从而完善现有的排斥反应理论，为临床治疗排斥反应提供新的更全面的免疫抑制策略。

本课题拟阐述器官移植排斥过程中，Th17细胞生成、调节及发挥作用的机制。具体情况如下：体外分选CD4+Th0细胞建立混培体系，诱导培养Th17细胞并鉴定纯度；建立移植排斥与耐受模型，尝试输注Th17细胞打破耐受，通过干扰Th17细胞形成延长移植物存活时间；检测皮肤移植物中Th17细胞的浸润程度及IL-17的分泌情况；通过门静脉输注供者抗原建立小鼠心脏移植耐受模型，检测了排斥和耐受状态下移植物中Th17细胞的表达和相关细胞因子的变化，以及移植物中干扰素调节因子-4和其结合蛋白IBP蛋白水平和转录水平的表达。构建微小RNA499过表达小鼠，检测其在器官保存和移植排斥中的作用，并阐明其与Th17之间的关系。成果情况如下：成功建立混培体系，诱导出相当纯度的Th17细胞，证实了Th17参与了排斥反应，输注Th17可以打破耐受，干扰Th17形成可以延长移植物存活时间；在排斥模型中，IRF-4和IBP分别呈活化和抑制状态，在耐受模型中，IRF-4和IBP分别呈抑制和活化状态；两种模型中，随着时间的延长IRF-4的表达逐渐增强，IBP表达逐渐减弱；微小RNA499过表达小鼠能对器官保存起到保护作用，改善移植物血管病，其机制可能与影响各种细胞因子的生成如TGF-β等，并影响Th17的作用有关。