细胞周期蛋白Cdc25C在人肝癌中的生物学及免疫学功能研究

Cdc25C(cell division cyclin 25 homolog C)是一种细胞分裂周期蛋白质，在真核生物的细胞有丝分裂中起重要调节作用，是控制细胞周期进入M期的关键因子之一。初步的研究发现细胞周期蛋白Cdc25C是一个肝癌相关抗原，具有潜在的开发应用前景。本项目将重组表达Cdc25C蛋白，用ELISA法检测肝癌病人血清中的Cdc25C抗体情况，探讨Cdc25C用于肝癌血清学诊断的临床应用价值。用原位杂交和免疫组织化学法检测正常人和肝癌组织中Cdc25C的表达情况，从mRNA表达和蛋白表达水平了解Cdc25C在肝癌发生发展中的作用和意义。以Cdc25C蛋白作为抗原，检测其致敏DC激活T淋巴细胞的效力，观察CTL对肝癌细胞的杀伤作用，为其抗原疫苗和肽表位疫苗应用于肝癌临床免疫治疗提供实验基础。

Cdc25C(cell division cyclin 25 homolog C)是一种细胞分裂周期蛋白质，在真核生物的细胞有丝分裂中起重要调节作用，是控制细胞周期进入M期的关键因子之一。初步的研究发现细胞周期蛋白Cdc25C是一个肝癌相关抗原，具有潜在的开发应用前景。在本研究中，（1）我们克隆了人Cdc25C基因（NM_001790.4）的全长，构建在pET-32a(+)原核表达载体上，并成功诱导出Cdc25C的融合蛋白。（2）用ELISA检测发现， HCC患者、病毒性乙型肝炎患者、肝硬化患者和正常人血清中均存在针对Cdc25C全长蛋白的抗体，其阳性率分别为85.2%、81.9%、77.8%和57.3%。血清Cdc25C抗体的出现与HCC患者年龄、性别、黄疸程度和ALT水平无关，但与血清白蛋白的降低情况相关。（3）通过原位杂交法检测HCC组织和相应癌旁组织, 结果显示HCC组织中的Cdc25C mRNA阳性率和表达强度均显著高于癌旁组织。Cdc25C mRNA高表达与HCC临床病理分级和是否伴有肝硬化相关，与年龄、性别和肿瘤大小无关。（4）利用生物信息学方法预测人Cdc25C蛋白可能的高级结构、亲水性和抗原性高低，根据分析结果选取其中同源性低、抗原性较高的多肽片段，采用固相多肽合成法合成多肽，免疫新西兰大白兔，制备出抗人Cdc25C特异性多肽的多克隆抗体。（5）用免疫组化法检测相同的HCC组织和相应癌旁组织, 结果显示HCC组织中的Cdc25C蛋白阳性率和表达强度均显著高于癌旁组织。Cdc25C 蛋白高表达与HCC临床病理分级、是否伴有肝硬化和性别相关，与年龄和肿瘤大小无关。上述结果说明，Cdc25C能引起免疫反应，并在mRNA表达和蛋白表达水平均与HCC的发生和发展密切相关，有望成为HCC早期诊断及预后判断的重要标记物。