肿瘤细胞塑形在肝癌血管生成拟态中的作用和分子机制研究

肿瘤细胞塑形是肿瘤转移和血管生成拟态形成的基础，其本质都是肿瘤细胞运动和细胞外基质的降解-重塑过程。本研究通过研究上皮-间充质转变调控因子Twist和Snail，构建过表达和RNAi的稳定肝癌细胞系来分析Twist和Snail在肝癌细胞转移和血管生成拟态中的作用，分析Twist或Snail是否参与VM相关的信号转导通路，在分子、细胞和动物层面证实VEGF-a/TGF-β-EphA2-PI3K-NF-κB-Twist/Snail-MMPs信号转导通路的存在。进而采用200例HCC临床病例进行免疫组化染色和临床病理分析予以验证。旨在阐明Twist/Snail在肝癌细胞转移和局部微循环模式中的作用及其分子机制，从而进一步丰富肿瘤血管生成理论并为临床抗血管生成治疗提供新的治疗靶点

肿瘤细胞塑形是肿瘤转移和血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）形成的基础，其本质都是肿瘤细胞运动和细胞外基质的降解-重塑过程。Twist相关的EMT（epithelial to mesenchymal transition，EMT ）现象在肿瘤血管生成的作用目前研究较少，以Twist为研究对象来进行EMT与VM相关性的研究是一个较好的切入点。本课题旨在探讨Twist在肿瘤细胞塑形和VM形成中的作用，拓展肿瘤血管生成理论，为临床治疗寻找新的靶点。本课题已完成申请书的全部工作，并且有一定的新发现和新探索，在如下几个方面取得了一定的进展。.（1）观察肿瘤细胞发生EMT促进VM的分子调控机制。该部分实验在人肝细胞肝癌中发现VM（+）病例与临床分期、转移复发具有正相关性、生存曲线显示生存期缩短，EMT相关转录因子Twist1浆表达和核表达与VM、E-cadherin、MMP2、MMP9和VE-cadherin表达相关。体外转染Twist1可增强肝癌细胞运动、侵袭和管道形成能力；利用CHIP技术和报告基因检测技术观察到Twist1会直接调控VM的重要标志分子VE-cadherin的转录和表达。.（2）应用分子生物学实验方法调控肝癌细胞EMT调控因子slug表达；流式细胞术检测肝癌细胞的CSCs表型表明slug促进了肝癌CSCs亚群数量的增加，干细胞标记物CD90及干细胞重编程因子sox2和nanog在slug过表达细胞呈现表达的增加。研究提示Slug能够通过Wnt和Notch信号通路上调sox2、nanog的表达诱导肿瘤细胞发生重编程从而形成肿瘤多潜能干细胞，使肿瘤细胞参与VM的形成。.(3) MMP-13在对肿瘤VM的形成起到负向调控的作用，而对肿瘤内皮依赖性血管的生成起到正向调控作用。MMP-13通过降解层粘连蛋白-5和VM形成的标志蛋白VE-cadherin而抑制VM的形成，MMP-13可将VE-cadherin降解成小片段，促进β-catenin从VE-cadherin/β-catenin复合物中释放并在细胞浆和细胞核内积聚，从而促进黑色素瘤的转移。.（4）提示USP44阳性表型的CSCs可能具有转分化的能力，从而促进VM的形成。研究CSCs形成VM的相关分子机制及信号通路，不仅有助于揭示进展期乳腺癌的转移机制，而且为临床治疗提供新的思路。