黄荆子活性物质群抗类风湿性关节炎的整合作用机制

本研究以具有显著抗类风湿性关节炎（RA）活性的中药黄荆子（Fructus Viticis Negundo ）活性提取物（VE）中的两种活性物质群- - 木脂素类（VEL）和萜类（VET）及其单体为研究对象，针对RA病程中的两个主要特征性病理变化- - 炎症损伤和关节骨质破坏，进行黄荆子VEL、VET抗RA的整合作用研究。采用II型胶原蛋白诱导大鼠RA模型和LPS刺激RAW264.7炎症细胞模型，明确活性物质群VEL及其活性单体抑制炎症损伤的具体作用机制；采用滑膜成纤维细胞、软骨细胞以及成骨细胞和破骨细胞培养试验，结合II型胶原蛋白诱导大鼠RA模型的组织病理切片，明确活性物质群VET及其活性单体改善关节骨质破坏的作用机制；结合这两条途径全面阐明黄荆子活性物质群VEL、VET抗RA整合作用机制，为黄荆子药用资源的开发利用和防治RA的新药研制提供很好的化学和药理学基础。

本课题以抗类风湿性关节炎（RA）中药黄荆子中两类活性物质群：木脂素类（VEL）和萜类（VET）及其单体成分为研究对象，针对RA病程中两个主要特征性病理变化：炎症损伤和关节骨质破坏，进行两类活性物质群抗RA作用研究。通过活性导向跟踪分离，从VEL中分离鉴定木脂素类化合物25个，其中新化合物11个，以6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-羟甲基-7-甲氧基-3,4-二氢-2-萘醛（VNL）和黄荆子碱A等苯代萘型木脂素为主要成分；从VET中分离鉴定萜类化合物24个，其中新化合物12个，以半日花烷型二萜尼古多醇和五环三萜乌苏酸为主要成分。在系统阐明VEL和VET 化学成分的基础上，采用LPS 刺激RAW264.7炎症细胞模型，明确VNL、黄荆子碱A、黄荆子素A以及蔓荆醛F为VEL主要抗炎活性成分，可显著降低NO、TNF-α和IL-1β水平，选择性抑制iNOS蛋白表达、下调NF-κB p65蛋白表达和抑制NF-κB核转位及其转录活性，提示VEL通过抑制NF-κB激活发挥抗炎活性。采用UMR106成骨样细胞和大鼠骨髓源性多核破骨细胞模型，明确尼古多醇和乌苏酸为VET的主要活性成分，可显著促进成骨细胞增殖、提高ALP活性或抑制破骨细胞TRACP活性，通过上调成骨细胞OPG/RANKL蛋白表达比例、下调破骨细胞中ERK、p38和IκB的磷酸化水平，调节RANK/RANKL/OPG、MAPK和NF-κB信号通路抑制破骨细胞的形成和分化，上调Bax/Bcl-2蛋白表达比例诱导RASF细胞凋亡，缓解RA关节骨质破坏。进一步采用RA大鼠模型，明确VEL及其活性成分VNL可有效降低大鼠关节炎指数、抑制大鼠足肿胀、显著降低大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平并提高IL-10水平、抑制滑膜组织增生和炎性细胞浸润、减轻骨侵蚀，具有良好的抗RA作用；VET体内无显著抗RA活性，但VET与VEL以1:4组合后，可显著提高VEL的体内抗RA活性。综上，研究结果提示VEL通过抑制NF-κB激活发挥抗炎作用，VET通过调节RANK/RANKL/OPG以及MAPK信号通路缓解关节骨质破坏，两者协同整合发挥抗RA作用。.通过本课题研究，已发表论文11篇（其中SCI论文7篇）；授权专利1项；培养研究生1名；参编英文专著2部；论文获奖2项。