基于本草挖掘的中药药效物质基础与作用机理研究- - 蜣螂抗良性前列腺增生症的实验研究

针对中药物质基础探寻的复杂性与传统理论现实化指导的缺失性，本课题拟在中医药整体观的指导下，以蜣螂作为模型药物，依据系统生物学的基本原理，提出本草挖掘这一新的继承与创新模式。从本草考证入手，采用聚类分析与信息融合技术对本草描述资料进行归类与抽提，构建以功效为核心的本草描述子系统，同时，利用Bayes推理网，关联药物的本草描述与现代研究两个系统，提出本草挖掘模式的初步假说，结合相应的药效筛选实验，采用适宜的分离、分析手段，从有效部位、有效成分、有效组分三个化学层次和整体动物、组织器官、细胞、分子生物学四个药理水平，来探索药物的物质内涵，以期建立一种高效、快速的中药药效物质基础与作用机理研究模式，力争使本草学由描述式的科学转变为定量描述和预测的科学，为中药物质基础与作用机理的研究提供理论支撑与科学依据，为中药现代研究中传统理论的现实化指导提供示范，促进中医药的传承与发展。

本项目以蜣螂为模型药物，查阅历代本草100余册，按名称、品种、药性、药用部位、采收加工、炮制、功能主治、禁忌、入药方法及剂型考证等9方面对蜣螂文献进行甄选汇总。继而结合中医辨证理论，采用共词聚类分析法，以蜣螂破瘀散结相关的各功能主治为对象，计算出该功效的频率为91%，表明其具良好的破瘀散结之功，而前列腺增生（BPH）治疗的关键性原则即为活血化瘀，故理论上蜣螂可治疗BPH，临床实践也印证了这种推断。综合考证结果，发现蜣螂治疗BPH时，采收多阴干，炮制多焙干，入药多研末冲服，表明其有效物质可能遇热不稳定，且不易溶于水，而蜣螂水提液可能有毒。. 为提高药效物质筛选的针对性，开展了急性毒性试验，结果蜣螂乙醇提取物对于小鼠在34.8g 原药材/kg体重内灌胃给药安全，而其水提物有严重不良反应，与本草挖掘结果吻合，故本项目以乙醇作为提取溶媒低温制备有效组分。结合丙酸睾酮致小鼠前列腺增生模型与去甲肾上腺素诱发犬膀胱三角肌收缩实验，采用系统溶剂法、DA201-C大孔树脂吸附、透析技术、葡聚糖凝胶色谱、SDS-PAGE电泳、高效毛细管电泳等分离分析手段，对蜣螂抗BPH的药效物质进行追踪，发现有效组分为醇溶性多肽与氨基酸，主要多肽为混合物，纯度达83.6%，分子量为6kd～14kd左右，构成序列有待深入研究。. 本草考证显示，蜣螂归肝经，绕行阴器，能消散组织腺体增生，故选丙酸睾酮致大鼠前列腺增生模型与细胞凋亡实验来初步揭示蜣螂抗BPH的作用机理。结果蜣螂能改善大鼠的生活状态，明显减小造模大鼠的前列腺指数，通过抑制腺体、腺上皮、腺体间质的增生而抑制前列腺增生。激素水平研究显示，蜣螂可能通过降低前列腺组织中的DHT、E2含量来抑制前列腺增生。免疫组化研究显示，蜣螂能不同程度抑制前列腺组织中EGF、bcl-2、ki-67的表达，增强TGF-β1与bax的表达，从而抑制前列腺增生。细胞凋亡实验表明，蜣螂能抑制人脐静脉内皮细胞EA.hy926细胞的活力，表明其可能通过抑制细胞增殖来抑制前列腺增生。. 通过本项目的实施，初步明确了蜣螂治疗BPH的物质基础与作用机理，可为本草学在中药现代研究中的科学预测与现实化指导提供示范，带动培养了一批在本草学、中药物质基础研究领域的优秀青年专业人才，发表论文9篇，其中中文核心8篇（含已录用2篇），EI收录1篇，申请专利1项。